Acido Urico

Stanbio LiquiColor®

Acido Urico-PAP

Procedimiento No. 1045

Para la determinación cuantitativa enzimática

colorimétrica de ácido úrico en suero, plasma

u orina

RESUMEN Y PRINCIPIO1,2.

La uricasa actúa sobre el ácido úrico para formar peróxido

de hidrógeno y alantoína. El H2O2 es leído cuantitativamente

por su reacción con el ácido 3,5-dicloro-2-hidroxibenzosulfónico

(DCHB) en presencia de peroxidasa y 4 aminofenazona,

para formar un complejo quinoneimina de color rojo

violeta.

MATERIALES REQUERIDOS PERO NO INCLUIDOS

- Espectrofotómetro capaz de leer absorbancias a 520 nm.

- Cubetas de 10 o 12 x 75 mm

- Bloque de calor/Baño a 37ºC (opcional)

- Pipetas serológicas o automáticas

- Mezclador vórtex

- Cronómetro

RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Se recomienda utilizar suero o plasma con heparina o

EDTA. Evite la hemólisis. Una orina de 24 horas debe

colectarse añadiendo 10 mL de hidróxido de sodio al 5% para

prevenir la precipitación del ácido úrico. Si está turbio, una

parte bien mezclada debe calentarse a 60°C por 10 minutos

para disolver los uratos precipitados. Diluir la orina 1:10

(1+9) con agua destilada. La orina así diluida se analiza y el

resultado se multiplica por el factor de dilución 10.

Estabilidad de la muestra

El ácido úrico en suero, plasma u orina se reporta estable de

2 a 3 días a temperatura ambiente (15 – 30ºC), de 3 a 7 días

a temperatura de 2 a 8ºC y de 6 a 12 meses cuando se

congela. La orina debe refrigerarse para evitar el desarrollo

bacterino.

Substancias interferentes

Niveles de hemoglobina mayores a 100 mg/dL y bilirrubinas

mayores a 20mg/dL afectan los resultados. El ácido

ascórbico puede dar falsos resultados bajos de ácido úrico,

en tanto que las muestras que presentan lipemia dan falsos

resultados elevados. Evite el formaldehído.

PARÁMETROS DE PRUEBA

Analizador Automático

Longitud de onda …………………………….. 520 nm

Tipo de reacción ………………………..……. Punto final

Dirección de reacción …………………..…… Incremento

Temperatura de reacción ……………….…... 37ºC

Relación muestra / reactivo ………….……… 1:50

Tiempo de equilibrio ……...………………….. 3 segundos

Tiempo de lectura ………………………….… 4 segundos

Fase Lag.............. ………………….………... 300 segundos

Límite de absorbancia del blanco ……….… 0.090 A

Máxima absorbancia …………….…………... 0.700 A

Valor normal bajo …………….…………….… 2.4 mg/dL

Valor normal alto …………………………...… 7.0 mg/dL

Linearidad ……...……………………………... 20 mg/dL

pH ……………………………………………… 7.5 + 1.0

Absorbancia inicial …………………………… < 0.400

Estándar ……………………………………… 8.0 mg/dL

Estos parámetros deben considerarse al programar el

analizador automático de ácido úrico. Consulte el manual para

instrucciones de programación.

REACTIVOS

- Acido úrico enzimático (líquido)

Buffer de fosfatos. pH 7.0 50 mmol/L

Acido 3,5-dicloro-2-hidroxibencensulfónico 4 mmol/L

4-aminofenazona 0.3 mmol/L

Peroxidasa > 1000 U/L

Uricasa > 200 U/L

- Estabilizadores y activadores en solución buffer

- Estándar de ácido úrico enzimático (8 mg/dL)

- Solución acuosa de ácido úrico con estabilizadores y solubilizadores.

Precaución: Para uso de diagnóstico In-Vitro.

Preparación del reactivo: El

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