TECNICAS DE PLAQUEO Y DE SIEMBRA PRACTICA # 1

TECNICAS DE PLAQUEO Y DE SIEMBRA

PRACTICA # 1

OBJETIVOS

• Desarrollar la Técnica SES y con picadura en agar inclinado.

MATERIALES

• Asa punta circular
• Asa de punta
• Tubos de ensayo
• Matraz con Agar nutritivo
• Incubadora
• Mechero
• Rejilla
• Varilla
• Cinta
• Medio de cultivo

DESARROLLO

• Aseguramos nuestra zona de trabajo con todos los materiales, prendemos el mechero.
• Primero para saber la cantidad de agar que ira el tubo y que nos dará la inclinación adecuada hacemos la prueba con agua.
• Absorbemos agua con la pipeta y la ponemos en el tubo de ensayo y observamos la inclinación adecuada en el tubo.
• Le sacamos en tapón al matraz con el agar, tomamos la pipeta le ponemos la pera con mucho cuidado acercándola a nuestro cuerpo, presionando muy levemente para no romperla.
• Introducimos la pipeta en el matraz y con la pera absorbemos el agar.  Este proceso hay que hacerlo rápido para que no se endurezca al agar en la pipeta;
• Ahora llevamos la pipeta al tubo de ensayo, que previamente lo pasamos por el mechero y descargamos el agar en el tubo de ensayo, aproximadamente 7ml.
• Llenamos 2 tubos uno para la Técnica SES (siembra por estría de superficie) y la técnica SP (Siembra por picadura)
• Colocamos los tubos con algo de apoyo, para forma la inclinación y dejarlo.
• Después que endureció procedemos a desarrollar las técnicas.
• Rotulamos los 2 tubos de ensayo, el de la técnica SES, es siembra de estría por superficie, empezamos desde la base y subimos formando la estría siempre cerca del mechero para evitar contaminación.
• La técnica SP, siembra por picadura con el asa de punta, esterilizamos el asa previamente y con mucho pulso, en todo el centro introducimos el asa y hacemos la picadura sin topa el fondo del tubo de ensayo.
• Lo metemos en la incubadora.

Siembra por estria de superficie

[pic 1]

Siembra por Picadura

[pic 2]

PRACTICA # 2

MÉTODO DE SIEMBRA POR AGOTAMIENTO O EN ESTRÍA

Necesitamos:

• Placa Petri con medio de cultivo

• Muestra (sólida o líquida)

• Asa de siembra de platino

Con el asa estéril tomamos la muestra y hacemos extensiones en la placa. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y extendemos parte de la extensión anterior en otra dirección. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y volvemos a extender parte de la segunda extensión en otra dirección. Esterilizamos y repetimos la operación.

Incubamos a 37 º durante 24 horas y, en la primera zona, habrá un amasijo de células. En la segunda, parte de la primera zona estará mejor extendida, y en la tercera y en la 4ª mejor aún.

Si tomamos una colonia y la ponemos sobre una placa petri, tendremos un cultivo puro.

[pic 3]

Técnicas de estriado:

a) Estriado simple:

Estriado continuo: Esteriliza el filamento del asa de siembra y toma la parte de la caja de petri que contiene el medio de cultivo sembrado. Cercas del mechero espera que se enfríe el asa y toma una colonia de la placa. Regresa la caja a su tapadera, ahora, toma una placa con agar estéril (donde se vaya a sembrar) y con cuidado de no romper el agar, inocula la muestra en un extremo de la placa y con el asa en posición ligeramente horizontal realiza las estrías (muy juntas), oscilando el asa de siembra sobre la superficie de una porción pequeña del agar; mediante un balanceo sucesivo y rápido de la muñeca.

b) Estriado en cuadrantes:

la mayor parte del inóculo e descarga en los cuadrantes 1y 2, lo que permite obtener colonias separadas en 3 y 4; Con un asa de siembra, previamente esterilizada, se toma una muestra del cultivo de microorganismos y se extiende sobre un área pequeña de la superficie de la placa con medio, en forma de estrías muy juntas, pero sin hacer presión para no dañar el medio. Se flamea el asa, se enfría y después de rozar la siembra realizada previamente, se extiende de nuevo por otra zona de la placa haciendo nuevas estrías. Este proceso se repite sucesivamente, flameando y enfriando el asa al comienzo de las sucesivas siembras en estría. Se lleva la placa a incubar, a la temperatura adecuada, siempre en posición invertida. Mediante esta técnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que contenga un elevado número de bacterias

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