Preparación De Materiales Y Medios De Cultivo Para Esterilizar

                PRÁCTICA N°3

Preparación De Materiales Y Medios De Cultivo Para Esterilizar

1. INTRODUCCIÓN

Para el estudio de los microorganismos es indispensable contar entre otras cosas con material y medios de cultivo estériles. En Microbiología la esterilización se define como “el proceso mediante el cual se eliminan todos los microorganismos (incluyendo formas de resistencia) de un objeto, medio o superficie” y su aplicación garantiza la ausencia de microorganismos en el material y medios de cultivo a ser empleados. Existen diversos métodos de esterilización, entre ellos: calor (seco o húmedo), filtración (para sustancias termolábiles y aire), radiaciones y aplicación de gas de óxido de etileno, pero el más recomendable es la técnica de autoclave.

Un medio de cultivo está constituido por una mezcla de agua y sustancias orgánicas e inorgánicas, los que en conjunto proporcionan los requerimientos nutricionales para el desarrollo de los microorganismos. La composición de los medios de cultivo varía en función de: grupo microbiano que se pretende estudiar,  complejidad química,  estado físico, y aplicación.

1. OBJETIVOS

Destacar la importancia de la esterilización de los materiales de microbiología para reducir la contaminación cruzada y garantizar la calidad de los análisis de microrganismos.

1. METODOLOGÍA

Materiales

• Medos de cultivo o ingredientes deshidratados
• Agua destilada o desionizada
• Algodón, gasa
• Balanza
• Erlenmeyers de 250 y 500 ml
• Espátulas
• Lápiz marcador de vidrio
• Papel indicador de pH
• Papel aluminio y papel corriente no absorbente
• Pipetas graduadas  
• Probetas de 100 ml
• Tubos de ensayo

Procedimiento

Preparación de Caldo nutritivo

 1.- Utilizando un trozo de papel aluminio pese cuidadosamente la cantidad de medio deshidratado suficiente para preparar 100ml de caldo nutritivo.

 2.- Coloque el polvo en un Erlenmeyer de 250 ml limpio y seco, y agregue cuidadosamente el agua destilada medida en la probeta.

 3.- Mezcle la preparación con movimientos giratorios hasta la completa disolución.

4.- Elabore tapones de algodón para 15 tubos, distribuya el medio líquido con una pipeta graduada a razón de 5 ml en cada tubo.

5.- Distribuya el medio líquido con una pipeta graduada a razón de 5 ml en cada tubo.

6.-Coloque los tapones de algodón a los tubos evitando que estén flojos o muy compactos.

7.- Disponga los tubos en un contenedor resistente al calor, envuélvalos con papel, identifíquelos con el nombre del medio, la fecha de preparación y el nombre de la persona responsable en la elaboración.

8.- Esterilice los tubos con medio en una autoclave a 121 °C (15 lb. de presión) durante 15 minutos.

Agar mac conkey

 Preparación de Agar nutritivo 

1.- Prepare 200 ml de caldo nutritivo. (Repita los pasos 1,2 y 3 del procedimiento anterior con la corrección en el peso para la nueva cantidad solicitada y en el Erlenmeyer a usar, debe tener unas tres veces el volumen que tendrá el medio).

 2.- Agregue 3 g de agar, y lleve a licuar en baño de agua a ebullición hasta que el medio luzca transparente a la luz.

 3.- Elabore tapones de algodón para unos 16 tubos

4.- Una vez licuado el medio, déjelo enfriar ligeramente y distribúyalos en los tubos con una pipeta graduada.

5.- Repita los pasos 6, 7,8 del procedimiento anterior.

 6.- El medio restante debe ser acondicionado para su esterilización junto a lo anterior. Preparación de Agar mac conkey

1. RESULTADOS

En el laboratorio tuvimos como resultado el presente trabajo experimental, pudimos observar que algunos materiales estaban llenos de agua, debido a que envolvieron mal la primera capa colocan otra encima cubriendo la capa anterior y esto impedía continuar el trabajo ya que no se puede verter el medio de cultivo  mientras los materiales estén llenos de agua, finalmente como grupo coincidimos en que esto ocurrió por una negligencia nuestra, ya que los materiales no estaban bien envueltos.

1. DISCUSIÓN:

En este  experimento uno de los mayores problemas o incógnitas que teníamos era el ¿Por qué se tiene que esterilizar todos los materiales? Y la respuesta encontrada fue que al hacer una nueva practica o análisis no deben quedar  residuos anteriores, si esto pasa queda contaminado por e reactivo anterior, esto puede llegar a afectar los resultados de tu nuevo análisis, además.

En nuestro laboratorio de microbiología  se recomienda esterilizar el material en una autoclave para eliminar todo microorganismo ya que esta utiliza altas temperaturas pero sin dañar el objetivo.

1. CONCLUSIÓN

La esterilización es la eliminación total de los todos los microorganismos incluyendo las esporas y que hay diversas técnicas para esterilizar una de ellas es la autoclave que se utiliza más en los laboratorios y es la que nosotros siempre utilizamos en la escuela, que es necesario tener bien esterilizado todos nuestros materiales para preparar medios de cultivos y evitar su contaminación con otros agentes ya que puede alterar los resultados.

1. CUESTIONARIO

1. ¿Cuáles son las ventajas de los medios complejos para el cultivo de microorganismos?

2. ¿Por qué no es necesario ajustar el pp en el caldo nutritivo y sí lo es en el agar almidón?

Si se utiliza agua neutra y un medio deshidratado de buena calidad el pH del medio usualmente quedará dentro de los límites adecuados, aun así, es conveniente ajustar el pH lo que se puede hacer con un potenciómetro o en su defecto con papel pH 4.0-7.0. Si el medio es sólido la medición y el eventual ajuste se hace a 45°-50°C (aún está liquido) y en los medios líquidos se hace a temperatura ambiente. La corrección del pH se efectúa con HCl o NaOH 1N o 0.1 N tomando una muestra del medio de cultivo preparado y estéril, se mide el pH y si fuera necesario se ajusta en la muestra calculando después el volumen de ácido o base que sea requerido para el total de medio

...