Informe de un experimento (extracción de ADN)

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Informe de un experimento (extracción de ADN)

Enviado por Arnulfo Salas Betancourt

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1. Introducción

2. Material necesario

3. Procedimiento

4. Resultados y explicación

5. Conclusión

6. Bibliografía

Introducción

La práctica la pudimos realizar en una cocina normal, como se puede realizar en un laboratorio de un centro. La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita la unión de las proteínas al ADN.

Objetivos

-Realizar la extracción de ADN de tejidosanimales y vegetales y reflexionar sobre la simpleza de su composición con sencillas técnicas.

- Observar la estructura fibrilar del ADN.

- Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades qu?mico-f?sicas del ADN

Material necesario

- Muestra vegetal (cebolla, ajó, tomate, etc.)

- Agua (destilada o mineral)

- Sal de mesa

- Bicarbonato sódico

- Detergente líquido o champú

- Alcohol isoamílico a 0°C

- Batidora

- Nevera

- Colador o centrífuga

- Vaso

- Tubo de ensayo

- Varilla fina

Procedimiento

1.- Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baño de hielo triturado:

• 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo.

• 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.

• 5 g de bicarbonato sódico.

• 5 ml de detergente líquido o champú.

2-. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber en la cocina (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.

3.- Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos. Y así se romperán muchas células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.

4.- Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar después los restos vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y después pipetear el sobrenadante.

5.- Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Se tiene que dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo éste inclinado. El alcohol va a quedar flotando sobre el tampón.

6- Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedará adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodón mojado.

Notas:

• Si se quiere realizar una extracción "profesional" puedes agregar enzimas que lo puede hacer mejor, y el producto que resultaría seria pura.

• Cuando añadas el alcohol frío debes hacerlo de forma que resbale por las paredes del tubo para que forme una capa sobre el filtrado. Para realizarlo mejor puedes utilizar la varilla de vidrio o una cucharilla para ayudarte.

• Si se expone por mucho tiempo la muestra vegetal a rayos ultravioletas, esto provoca daños sobre la estructura del ADN, o aplicar ciertos conservantes que puedan provocar efectos sobre la cadena del ADN.

Resultados y explicación

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN.

Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene lauril sulfato de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la misma manera en el protocolo de extracción de ADN, separando las grasas (lípidos) y las proteínas que constituyen las membranas que rodean la célula y el núcleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la célula

El calor suaviza los fosfolípidos (grasas) en las membranas que rodean la célula y el núcleo. También desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleicas (ADNasas) las cuales, si están presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeños que lo haría imposible de ver. Si las enzimas se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, éste pierde su forma y se vuelve inactivo. Las enzimas se desnaturalizan a 60° Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80° Celsius.

Los zumos de piña y papaya contienen un enzima, la papaína, la solución ablandadora de carne también actúa como una enzima, que contribuye a eliminar las proteínas que puedan contaminar el ADN. La solución

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