COMPONENTES DEL KIT Neogen 9515B

1. DETERMINACION DE HISTAMINA

• Histamina: Amina biogênica producida por la descarboxilación del aminoácido  histidina.

1. OBJETIVO

Determinar la cantidad de histamina en la MP recibida.

1. ALCANCE

El procedimiento  se  aplica  desde la Recepción de Materia Prima.

1. FUNDAMENTO: Rida Quick Histamin,

Es un ensayo colorimétrico para la cuantificación de Histamina en pescado fresco, congelado ó conservas en el rango de 0 a 40 ppm (mg/kg).

1. MATERIAL Y METODOS

COMPONENTES DEL KIT Neogen  9515B

• 288  micropozos desglosables recubiertos con anticuerpos.
• 288  micropozos desglosables para mezclado con marca roja.
• 12 frascos con  control de Histamina. Etiqueta amarilla.
• 02 frascos de solución de Conjugado. Etiqueta azul.
• 6 sobres conteniendo polvo  Buffer diluente (sample diluent) para extracto de muestra (10 mM PBS).  Se disuelve 1  sobre en 1 litro de agua. Se guarda en oscuridad a temperatura ambiente.
• 2  frasco cada uno con  40 ml de Buffer de lavado concentrado (Wash buffer). El contenido de 1 frasco se disuelve en 960 ml de agua.  Se guarda en oscuridad a temperatura ambiente.
• 2 frasco de solución de Substrato K-Blue®. Etiqueta verde
• 2 frascos de solución stop. Etiqueta roja.

Equipo:

• Molinillo o licuadora.
• Probeta graduada a 100 ml.
• Vaso de vidrio para preparación de la muestra.
• Papel filtro, pipetas1 ml., Tubo de ensayo.
• Pipeta para dispensar 100 ul y bolsa de 1000 puntas de pipeta.
• Balanza
• Probeta plástica graduada de 100 ml

Reactivos:

• Agua destilada        

1. PROCEDIMIENTO

• Preparación de la Muestra  Para  Pescado  Crudo  Fresco o Descongelado AOAC 937.07 a:

1. Limpie  y eviscere  tres pescados.
2. Haga tres cortes transversales de 2,5cm (1 pulg.) de grosor: uno    detrás de las aletas pectorales, otro a la  mitad  del Orificio  de   respiración  y el tercero  detrás del   orificio  de  respiración.  
3. Retire  los huesos  de las rebanadas.
4. Mezcle  o muela o corte muy finamente  las muestras combinadas    hasta  que sean  homogéneas.        
5. Almacene  las  muestras a una temperatura  de 2 a 8ºC hasta  su  análisis.(Si no puede trozar finamente  las muestras Con una tijera,     coloque los trozos  dentro de una bolsa plástica gruesa  y proceda  ahí a       desmenuzarlas  por presión de los dedos).
6. Preparación de la muestra:  luego de molido
7. Moler y homogenizar la muestra. Pesar (según muestra a realizar)  y agregarle          agua destilada (según muestra a realizar)

PROCEDIMIENTO DE MEZCLADO DE MUESTRA CON AGUA

Agitar vigorosamente por 20 segundos.  Esperar 5 minutos. Agitar nuevamente por 20 segundos. Esperar 5 minutos. Agitar nuevamente la muestra por 20 segundos. Dejar sedimentar por 30 segundos. Filtrar el sobrenadante. El extracto se coloca en un recipiente limpio.

1. PROCEDIMIENTO FILTRADO:

Conservas - filtre usando  papel de filtración rápida ó use la jeringa con  filtro Neogen proveído en el kit de extracción. (Saque el embolo, coloque sobrenadante, coloque el embolo y presione.)

Pescado -  filtre usando  papel de filtración rápida  o deje que la mezcla sedimente (lo hace rápidamente). Usando la  pipeta de 100 ul  retire sobrenadante libre de residuos.

1. USO DEL KIT ALERT

• Separar pozos de mezclado (rojos) tantos como control y muestras a evaluar. Separar el mismo número de pozos con anticuerpos (blancos). Ejemplo si va a evaluar 3  muestras debe separar  4 pozos rojos y 4  pozos blancos

[pic 1]

Usando 1 sola punta de pipeta, adicione  100 ul de Conjugado (frasco azul)  a todos los pozos rojos

Usando 1 nueva  punta de pipeta adicione 100 ul del control al primer pozo rojo. Con esa misma punta mezcle el contenido 3 veces (aspirar y botar suavemente). [pic 2]

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