El reactivo de Resina/Separador debe estar a temperatura ambiente antes de comenzar el procedimiento de prueba.

HEMOGLOBINA GLICOSILADA

Nota: 1) El reactivo de Resina/Separador debe estar a temperatura ambiente antes de comenzar el procedimiento de prueba.

A. PREPARACION DE HEMOLIZADO:[pic 1]

1. Coloque 0.5 mL de Reactivo Separador (reactivo lisante) en tubos etiquetados: CALIBRADOR, CONTROL, MUESTRA 1,2,3,.. ETC.

2. Coloque 0.1 mL de muestra de sangre bien mezclada en un tubo debidamente etiquetado. Mezcle hasta que la separación completa sea evidente.[pic 2]

3. Luego reposar por 5 minutos.

B. SEPARACION DE GLICOHEMOGLOBINA:

1. Etiquetar los tubos de resina (diluyente) : CALIBRADOR, CONTROL, MUESTRA1,2,3... etc.

2. Colocar 0.1 mL del hemolizado del paso A en el tubo de resina propiamente etiquetado.

3. Luego poner el filtro separador en el tubo de modo que la manga de goma esté aproximadamente a 2 cm por encima del nivel de líquido.[pic 3][pic 4]

4. Colocar los tubos en el mezclador automático o un rotador para que se mezcle continuamente durante 5 minutos.

5. Retire los tubos del mezclador

6. Para facilitar la separación, permita que los tubos estén verticales en el tablero de tubos de ensayo durante unos cuantos minutos, luego empuje el filtro separador en el tubo hasta que la resina esté firmemente compactada.

7. Coloque el liquido sobrenadante en otro tubo o directamente en una cubeta para medir la absorbencia.

8. Ajuste el instrumento cero absorbencia a 415 nm utilizando agua destilada  como blanco.

9. Lea y registre los valores de absorbencia para CALIBRADOR, CONTROL, MUESTRA 1,2,3.. etc. Estas lecturas son para glicohemoglobina.[pic 5][pic 6]

C. Fracción del Total de Hemoglobina

1. Coloque 5.0 mL de agua destilada en tubos etiquetados: CALIBRADOR, CONTROL, MUESTRA 1,2,3... etc.

2. Coloque 0.02 mL de hemolizado del Paso A en el tubo propiamente etiquetado. Mezcle bien.

3. Ajuste el instrumento cero absorbencia a 415 nm usando agua desionizada como blanco.

4. Lea y registre los valores de absorbencia para CALIBRADOR, CONTROL, MUESTRA 1,2,3... etc. Estas lecturas son para el total de hemoglobina.

 CALCULOS [pic 7]

        RESULTADO        Glicohemoglobina[pic 8][pic 9][pic 10]

                                        Total de hemoglobina

[pic 11]

[pic 12][pic 13]

VALORES

NORMAL  ---------------        4.0 - 6.2%

BUEN CONTROL --------        5.5 - 6.8%

REGULAR CONTROL ----        6.8 - 7.6%

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