Determinacion Acido Acetico

METODO DE DETERMINACION DEL ACIDO CITRICO

La determinación de ácido cítrico se realiza a traves de una reacción enzimática, acá te dejo la determinación que se le realiza a los vinos, puedes adaptarla al limón exprimiendo su jugo. También se que vienen kit para la determinación que se basan en el mismo método.

ÁCIDO CÍTRICO

El ácido cítrico se transforma en oxaloacetato mediante una reacción catalizada por la citrato-liasa (CL) citrato oxalato + acetato.

En presencia de malato-deshidrogenasa (MDH) y de lactato deshidrogenasa (LDH), el oxalacetato y su derivado de descarboxilación, el piruvato se reduce en L-malato y L-lactato por la nicotinamida -adenina -dinucleótida reducida (NADH). Oxaloacetato + NADH+H+L-malato+NDA+Piruvato+NADH+H+L-la…

La cantidad de NADH oxidada a NAD+ en estas reacciones es proporcional al citrato presente. La oxidación de la NADH se mide mediante la disminución de su absorbancia a una longitud de onda de 340 nm2.

Reactivos

1. Tampón pH=7.8

2. Solución de nicotinamida-adenin-dinucleótido -reducida (NADH).

3. Solución de malato-deshidrogenasa lactato (MDH/LDH).

4. Citrato liasa (CL).

5. Polivinil polipinolidona (PVPP).

Material

- Espectofotómetro con medidas de 340nm de absorción de NADH.

- Cubetas de vidrio de 1 cm de trayecto óptico.

- Micropipetas para tomar volúmenes entre 0.02 ml y 2 ml.

Preparación de la muestra

- La determinación de citrato se efectúa directamente sobre el vino sin decoloración ni dilución, cuando el contenido de ácido cítrico sea menor a 400 mg/l.

- El vino tinto se recomienda tratarlo antes con PVPP, se pone en suspensión al agua alrededor de 0.2g de PVPP y se deja 15 minutos en reposo. Se filtra sobre filtro de pliegues.

- Se añade una cantidad de vino de 10ml a un erlenmeyer, el PVPP húmedo se extrae con una espátula de vidrio. Se agita durante 3 minutos y se filtra de nuevo.

Proceso

Se ajusta la cantidad de onda a 340 nm y se realizan las medidas de absorbancia en cubetas de 1 cm. La absorbancia de debe ajustar con respecto al aire. Se coge una cantidad de 1 ml de testigo muestra solución. Se mezcla transcurridos unos 5 minutos, se espera a que finalice la reacción y se leen las absorbancias de la muestra DA = DAM.DAT.

Método de cálculo.

El contenido de ácido cítrico se expresa en (mg/l) miligramos litro. La concentración en mg/l viene dada por la fórmula general:

V= volumen total en mml.

V= volumen de la muestra.

PM = peso molecular de la sustancia que se va a diluir. (ácido cítrico).

d= trayecto óptico de la cubeta.

e= coeficiente de excitación del NADH a 340 nm, e=6.3 mmol/cm.

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