Efecto de diferentes niveles de vitamina A en la dieta del langostino Pleoticus muelleri

Efecto de diferentes niveles de vitamina A en la dieta del langostino Pleoticus muelleri (Bate, 1888) (Decapoda, Solenoceridae)

Analía V. Fernández Gimenez1,2, Ana C. Díaz1,3, Susana M. Velurtas1, Ana M. Petriella1,2 and Jorge L. Fenucci1,2

1Departamento de Ciencias Marinas, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad Nacional de Mar del Plata, Argentina 2Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas CONICET, Buenos Aires, Argentina 3Comisión de Investigaciones Científicas CIC. Funes 3350, B7602AYL, Mar del Plata, Argentina acdiaz@mdp.edu.ar

Resumen.-

• Se evaluó el crecimiento, la supervivencia, morfología celular, estructura y la actividad enzimática de proteinasas del hepatopáncreas del langostino Pleoticus muelleri (Bate, 1888).
• Se realizó un experimento con juveniles en acuarios durante 6 semanas. Los animales fueron alimentados con dietas semipurificadas con diferentes niveles de vitamina A (140, 160 y 180 mg vitamina A kg-1 dieta).
• No hubo diferencias significativas en supervivencia e incremento en peso en los distintos tratamientos en las condiciones de trabajo.
• El estudio histológico permitió visualizar cambios estructurales en el hepatopáncreas de los individuos alimentados con diferentes niveles de vitamina A.
• Los organismos del tratamiento de 180 mg kg-1 presentaron una morfología funcional normal, en cambio en los alimentados con las otras dietas se observó un deterioro del órgano que denota signos de desnutrición, tales como: hiperplasia e hipertrofia celular, desorganización del tejido y retracción celular.
• La mayor actividad de proteinasas se registró en los tratamientos de 140 y 160 mg kg-1 y se observó una disminución significativa en el de 180 mg kg-1. Se puede concluir que el nivel recomendado de vitamina A en la dieta para P. muelleri es de 180 mg kg-1 y que en situaciones de desnutrición el hepatopáncreas presenta importantes cambios estructurales y alteración en la actividad de las proteasas.

Palabras clave: Crustacea, crecimiento, hepatopáncreas, nutrición, cultivo

INTRODUCCION

• La gamba roja Pleoticus muelleri (Bate, 1888) es la especie de peneidos más abundantes en el Mar Argentino y se distribuye entre 20 y 50 ° S (Boschi 1986). A medida que la disponibilidad de las capturas comerciales experimenta fluctuaciones anuales (FAO), es importante para establecer la viabilidad de cultivar esta especie con el fin de mantener un suministro continuo al mercado. Este camarón ha adquirido gran interés por su uso potencial en el cultivo en zonas templadas. Los menores de 3 gramos de peso medio llega a 20 gramos en 5 meses criados en tanques de 3000 L-
• (Fenucci et. Al 1990). Uno de los principales obstáculos para la cultura de esta especie de peneidos es el conocimiento inadecuado de sus necesidades nutricionales. Varios estudios han revelado que las vitaminas liposolubles A, D, E y K son esenciales en la mayoría de los animales para una buena salud y para realizar diferentes funciones de la vida, como el crecimiento, el desarrollo, el mantenimiento y la reproducción (He et al. 1992) . Muchos estudios han evaluado la esencialidad dietética de vitamina A para peneidos (He et al. 1992, Liang y Ji 1998, Reddy et al., 1999a, 1999b).
• La vitamina A es esencial para la estructura y la función normal de los ojos y branquias en los peces (Poston 1986), debido a su implicación en el metabolismo de mucopolisacárido, pigmentos visuales, y en general el mantenimiento de los epitelios diferenciada en varios sistemas fisiológicos (Tacon 1991). También está implicado en el transporte de calcio a través de algunas membranas, en la reproducción y el desarrollo embrionario, y en la integridad de la membrana celular y subcelular (Akiyama et al. 1991).
• La vitamina A se concentra en los ojos de los crustáceos y no se distribuye por todo el cuerpo, como en los vertebrados. Esta distribución localizada sugiere que el papel de esta vitamina en los crustáceos puede ser más limitada que en los vertebrados (Conklin 1997). Aunque estos hechos, hallazgos recientes en los crustáceos señala la importancia de los retinoides como moléculas bioactivas reside en gran medida en su conversión a ácido retinoico, que están involucrados en la activación de los receptores nucleares de retinoides y en el desarrollo y la función del cuerpo (Liñán- Cabello et al., 2002).
• Los hepatopáncreas es el órgano más grande de crustáceos decápodos y tiene muchas funciones biológicas, incluyendo la síntesis y secreción de enzimas digestivas, la absorción de los productos digeridos, el mantenimiento de las reservas de minerales y sustancias orgánicas, el metabolismo de lípidos y carbohidratos, la distribución de las reservas almacenadas durante el ciclo de muda, y el catabolismo de algunos compuestos orgánicos (Ceccaldi 1.997).
• La histología de hepatopáncreas de P. muelleri en intermuda es morfológicamente similar a la descrita para la otra Decapoda (Fig. 1) (Cuartas et al. 2002). La digestión ha sido una de las áreas estudiadas más intensamente de la nutrición de camarón, con énfasis en las enzimas. En varios casos, los ensayos se llevaron a cabo sólo con el hepatopáncreas; en otros, se utilizó todo el intestino.
• La actividad de proteinasas durante las diferentes etapas de muda en hepatopáncreas de salvaje P. muelleri fue estudiada por Fernández-Giménez et al. (2001). Este conocimiento, finalmente, se puede utilizar como una referencia para el cultivo de la especie. Este estudio evaluó los niveles óptimos de vitamina A en dietas para Pleoticus muelleri, mediante cambios histológicos de células hepatopáncreas, y enzimas digestivas actividad como indicadores de la deficiencia de la vitamina.

MATERIALES Y MÉTODOS

• Un ensayo de alimentación de seis semanas se llevó a cabo para determinar la efecto del suplemento de la dieta de vitamina A en el aumento de peso, supervivencia, morfología celular hepatopáncreas, y proteinasa actividad. El sistema experimental consistió de vidrio 150-L acuarios, con filtro de grava bajo la forma descrita por Boschi (1972). Los juveniles fueron criados desde planteado hatchery- postlarvas (reproductores silvestres de Mar del Plata, Argentina). Nauplios fueron trasladados a la surgencia de 3,5 toneladas tanques y mantuvieron a 21 ° C (± 1 ° C).
• Las larvas fueron criadas en una dieta de algas (Chaetoceros gracilis, Tetraselmis chuii) y Artemia persimilis nauplios. Durante la larvicultura, Los animales fueron alimentados alimentaciones microencapsulados de diferente tamaño de partícula: protozoea 1 (0,30 m), protozoea 2 y 3 (De 30 a 90 micras), mysis y postlarvas temprana (80 a 150 micras) (Mallo et al. 1999).
• Ciento cinco camarones pesa 1 g peso medio se distribuyeron aleatoriamente en acuarios a una densidad de 7 animales acuario-1. Tres fueron asignados replicar acuarios para cada tratamiento. Antes al inicio de la prueba de alimentación, camarones fueron alimentados con la dieta sin suplementos de vitamina A durante 7 días. Este periodo se utilizó para agotar la vitamina tejido Una reserva.

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• FIGURA 1: Hepatopáncreas de individuos silvestres de P. muelleri: corte transversal de un túbulo que muestra los distintos tipos de células epiteliales. Se observa el estrechamiento del lumen y el escaso espacio intertubular. b: célula B, f: célula F, r: célula R, l: lumen. Barra= 25μm

• Tres niveles (140, 160, y 180 mg Rovimix A 500 kg-1 dieta) [500.000 UI de vitamina A g-1 Rovimix A 500] (el uso de esta vitamina no implica una aprobación de este producto), se añadieron a una dieta semi-purificada. Dietética ingredientes (Tabla 1) se mezclaron y se prepararon dietas mediante el proceso de extrusión en frío, a continuación, secado al horno a 45 ° C durante 24 h (Fenucci y Zayn Eldin 1976). Un control grupo fue alimentado con el manto del calamar fresco (Illex argentinus Castellanos, 1960) y el otro con una vitamina libre dieta semipurificada.

Tabla 1. Composición de ingredientes de las dietas semi-purificadas standart

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• La temperatura del agua varía entre 17 y 22 ° C, la salinidad fue de 34 g L-1 y pH 6,5. La alimentación inicial fue 5% de la biomasa en cada acuario. Todos los días, la cantidad de alimentos se ajustó a los requisitos de camarones, y exuviae y individuos muertos se registraron. Al final del experimento, el camarón de cada acuario se contaron y se pesó. Las muestras de los individuos en el mismo tratamiento, en fase intermuda (Díaz Y Petriella 1990) se reunieron de inmediato y congelados para la liofilización. Hepatopáncreas secadas se homogeneizaron en agua destilada fría y se centrifugaron durante 30 min a 10 000 g y a 4 ° C.
• Los lípidos fueron eliminados y la proteína soluble se evaluó en los sobrenadantes (Bradford 1976), con albúmina de clara de huevo de pollo (Sigma) como el estándar. La actividad de proteinasa se midió cinéticamente la utilización de sustrato cromogénico. El sustrato 1% azocaseına se disolvió en las soluciones tampón pH 7,5 (Fernández-Giménez et al. 2001). Triplicados de 5 l de extractos enzimáticos se mezclaron con 0,5 ml de tampón y 0,5 ml de solución de sustrato. Las mezclas de reacción se incubaron durante 10 min a 25 ° C.
• La proteolisis se detuvo añadiendo 0,5 ml de TCA al 20% de ácido tricloroacético, y la mezcla se centrifugó en tubos Eppendorf durante 5 min a 14 000 g. Los sobrenadantes se separaron del sustrato sin digerir y la absorbancia a 366 nm se registró con un espectrofotómetro (Shimadzu UV-2102 PC, Scanning Espectrofotómetro UV-visible) para el tinte liberado (García-Carreño 1992). Al final del experimento, se seleccionaron seis individuos de cada tratamiento en la etapa intermuda para estudios histológicos. Hepatopáncreas se fijaron en fijador de Davidson (agua destilada, etanol, formaldehído, ácido acético) durante 24 h, se incluyeron en parafina y se cortaron secciones de tejido de aproximadamente 5 micras y se tiñeron con hematoxilina y eosina (Bell & Lightner 1988).
• Se analizaron las dietas para cenizas (550 ° C) y la materia seca (60 ° C). La proteína total se estimó por el método de micro-Kjeldahl (Barnes 1959), y los lípidos totales se determinaron utilizando el método de Soxhlet (IRAM 1985). Los siguientes análisis estadísticos a 0,05 nivel de significación (Sokal y Rohlf 1995) se realizaron: Cochran o Bartlett, ANOVA y Student de t-test se utilizaron para encontrar las diferencias entre las medias, y se aplicó la prueba chi-cuadrado para evaluar las diferencias en porcentaje de supervivencia.

RESULTADOS

• Al final del experimento, el porcentaje de ganancia de peso de los camarones alimentados con distintas dietas variaron de 45 a 73% en todos los tratamientos, sin diferencias significativas entre ellos. La supervivencia fue entre el 62 y el 95%, y no hubo diferencias significativas entre los controles (calamar y dieta libre de vitaminas) y los otros tratamientos (Cuadro 2). Camarones alimentados con 140 mg (Fig 2) y 160 mg de vitamina A kg-1 dieta exhibió algunos cambios histopatológicos en el hepatopáncreas, tales como la hiperplasia y la hipertrofia celular, tejido desorganizado, y la contracción de las células. Estas alteraciones son signos comunes de desnutrición.

Tabla 2 El aumento de peso y la supervivencia de los juveniles alimentados con diferentes dietas

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Figura 2 hepatopáncreas de P. muelleri alimentados con una dieta con 140 mg kg-1: la sección transversal a través de un túbulos, mostrando el tejido desorganizado con la hipertrofia y la contracción de las células. Bar = 50 micras μμ μμ

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