Etapa 1 ATI trabajo medicina

Resultados

Extracción y análisis de DNA genómico

1. Describir los resultados obtenidos y la manera en que se realizó la extracción de DNA y anotar sus observaciones.

Los resultados obtenidos fueron:

• Abs→260= 0.005
• Abs→280: 0.001

La extracción del DNA fue a partir de una muestra de sangre y la manera en que se realizó fue mediante la técnica de TSNT, la cual consiste en:

• Agregarle buffer de lisis a un tubo eppendorf con la muestra de sangre y mezclar.

[pic 1]

• Agregarle fenol y sevag y agitar vigorosamente.

[pic 2]  [pic 3]

• Agregar TE 1X y centrifugar.

[pic 4]

• Recuperar la fase acuosa y pasarla a otro tubo eppendorf.

[pic 5]  [pic 6]

• Al nuevo tubo agregarle etanol 96% y agitar suavemente hasta observar la precipitación del DNA.

[pic 7]

• Centrifugar.
• Decantar el sobrenadante sin desprender la pastilla.
• Agregarle etanol 70%.

[pic 8]

• Lavar la pastilla, centrifugar, decantar y secar.

[pic 9]

• Resuspender.

Observaciones:

1. Determinar la concentración y la calidad del DNA obtenido.

• Concentración: = 5[pic 10]
• Calidad:  (50)(     )(260)= 125.25g/µL

1. Analizar los resultados obtenidos de la cuantificación del DNA por espectrofotometría de luz U.V.

Electroforesis de DNA en gel de agarosa

1. Describir el desarrollo de esta práctica y anotar sus observaciones.

La práctica se realizó:

• A  1.5 g de agarosa le agregamos buffer TBE 1X, se llevó a ebullición y se dejó enfriar hasta que obtuvo los 50°C.
• Vaciamos la agarosa y se dejó gelificar.
• Una vez que estaba gelificada, se colocó en la cámara de electroforesis y se le agregó buffer TBE.
• Se hicieron muestras de DNA genómico y de producto amplificado y se le agregó a la placa de gel de agarosa.
• Se encendió la cámara de electroforesis y se le aplicó un voltaje de 50V y se le aumentó a 100V.

[pic 11]

• Una vez terminado, se sacó el gel de la cámara y se colocó en una solución de bromuro de etidio y posteriormente se lavó el gel con agua.

[pic 12]

Observaciones:

1. Anexar la imagen del gel y analizar los resultados obtenidos, incluir: tipo y concentración del gel, voltaje y tiempo de corrimiento de la electroforesis, identificar las muestras colocadas en cada uno de los carriles del gel y cada fragmento observado indicando su tamaño.

[pic 13]  [pic 14]

...