Guia De Fitopatologia

Guía de introducción a la fitopatología

Requerimientos básicos de un laboratorio de fitopatología

Una de las actividades más importantes de la fitopatología es el trabajo en el laboratorio; ahí se realiza investigación básica, se aíslan e identifican patógenos y se produce inoculo para inducir epifitas en forma artificial en campo o invernadero, en apoyo a los programas de mejoramiento genético.

Aparatos básicos

Entre los aparatos indispensables y/o convenientes en un laboratorio figuran esterilizadores,

Autoclaves (eléctricos o de gas) y estufas, cámaras de aislamiento, incubadoras, microscopios, Estereoscopios y un baño María.

Autoclave. Consiste primordialmente en una cámara de esterilización por medio de calor húmedo. El vapor en su interior alcanza una temperatura de 120 oC y una presión de 18 lb/pulgada2 (1.4 kg/cm2). El calor puede provenir de una fuente eléctrica o de un mechero de gas, como es el caso de la olla de presión. Esta puede funcionar como un autoclave grande y tiene la ventaja de ser de bajo costo. Ambos aparatos se usan preferentemente para esterilizar medios de cultivo, pero también se pueden utilizar para esterilizar tierra, arena, vermiculita o cualquier otro sustrato usado para el crecimiento de plantas

o microorganismos.

Estufa. Con ella se pueden obtener, por medio de calor seco, diferentes temperaturas que se utilizan para distintos propósitos –por ejemplo, para secar material vegetal o tierra a una temperatura constante o esterilizar materiales de vidrio a altas temperaturas.

Cámaras de aislamiento. Entre estas figuran las cámaras de flujo laminar con un mecanismo que permite que el aire fluya hacia afuera a través de filtros, a fin de crear condiciones de esterilidad y prevenir la contaminación. Si no se cuenta con este tipo de cámara, existen otras pequeñas (microvoids) que funcionan con un mecanismo similar, o bien, puede acondicionarse un cuarto pequeño sin corrientes de aire y, con la ayuda de un mechero, evitar la contaminación.

Incubadoras. Estas pueden ser calibradas a diferentes rangos y combinaciones de luz y temperatura, a fin de lograr las condiciones óptimas para el crecimiento de los diferentes organismos con que se esté trabajando.,

Refrigeradores. Estos son esenciales principalmente para el almacenamiento de muestras vegetales, cultivos, reactivos, etc.

Baño maría. Este aparato consta de un recipiente en el que el agua se puede mantener a temperaturas constantes. El baño maría tiene varios usos. Por ejemplo, se pueden colocar en el (a una temperatura de 46 oC) matraces con medios de cultivos recién esterilizados antes de vaciarlos en las cajas Petri. El baño maría es indispensable en experimentos para medir el crecimiento de algunos organismos en medios líquidos en condiciones de temperaturas exactas, y estudios en virología y bacteriología, entre otros.

Microscopios y estereoscopios. Son indispensables para la identificación y clasificación de patógenos, la observación de síntomas y diferentes tipos de daño, así como la evaluación de experimentos.

Asepsia

En un laboratorio de fitopatología la asepsia es primordial, ya que en la mayoría de los casos se debe trabajar en ambientes lo más estériles posible. Por esta razón es importante contar con cuartos de aislamiento y/o cámaras de flujo laminar (o similares) en las que se pueda trabajar con el patógeno sin riesgos de contaminación. Los riesgos de contaminación pueden provenir de diversos factores, como los utensilios de trabajo y las mismas manos del laboratorista. Los utensilios de trabajo (pinzas, navajas, asas, etc.) deben ser esterilizados cada vez que se usan, pasándolos por alcohol y subsecuentemente flameándolos. En cuanto a las manos, es recomendable lavarlas y limpiarlas con alcohol cada vez que se vaya a trabajar en condiciones estériles Algunos hongos que se encuentran como saprofitos en la mayoría de las muestras vegetales y en el ambiente del laboratorio, o donde se trabaje la muestra, tienen gran capacidad de crecimiento y reproducción, por lo que es muy importante tener cuidado al trabajar. Al laboratorio debe introducirse la Menor cantidad de material vegetal posible (las muestras deben limitarse al mínimo) y, sobre todo, no manejarlo como inoculo dentro del laboratorio. En esta forma se evita la contaminación del área de trabajo del laboratorio, que es muy difícil de controlar una vez que ha ocurrido. La contaminación por ácaros también es común, sobre todo en cajas Petri de vidrio que se han deformado como consecuencia de la esterilización con calor seco. Los ácaros pueden invadir cajas o tubos mal sellados

y contaminar los cultivos; esta contaminación es muy difícil de erradicar. Por lo tanto, es necesario desinfectar el material vegetal proveniente del campo, tomar precauciones con cultivos procedentes de otros laboratorios, sellar bien los tubos y cajas, fumigar las incubadoras, etc. Si se tiene contaminación con ácaros, se recomienda sacar todo el contenido de las incubadoras y estufas, elevar la temperatura por sobre los 50 oC durante un par de horas y repetir el procedimiento dos días después

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