Informe No.7 “Efecto del pH y la concentración en la intensidad de fluorescencia de Riboflavina”.

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA

Laboratorio de Métodos de Análisis

Informe No.7 “Efecto del pH y la concentración en la intensidad de fluorescencia de Riboflavina”

Grupo:5QM2

Sección: 4

Profesora: Violeta Larios Serrato

Alumna: Rivera Martínez Arisbe Danahe

Equipo de Laboratorio: Yamile Pelcastre Gómez

Fecha de Realización: Miércoles 21 de Septiembre de 2016

Fecha de Entrega: Miércoles 28 de Septiembre de 2016

INTRODUCCIÓN

La fluorescencia es un proceso de emisión en el cual las moléculas son excitadas por la absorción de radiación electromagnética. Las especies excitadas se relajan al estado fundamental, liberando su exceso de energía en forma de fotones. una de las características más atractivas de los métodos de fluorescencia es su sensibilidad inherente, la cual es , con frecuencia, de uno a tres ordenes de magnitud mejor que las de la espectroscopía de absorción. No obstante, los métodos de fluorescencia se aplican mucho menos que los métodos de absorción debido al número relativamente limitado de sistemasquímicos que se pueden hacer fluorescer.(1)

La Vitamina B2 es una vitamina hidrosoluble. Bajo esta denominación, o la genérica de "riboflavina" se agrupan la riboflavina propiamente dicha y los coenzimas derivados suyos, cuya estructura está formada por el ribitol (un polialcohol de 5 átomos de carbono) y la 7,8-dimetilisoaloxazina. (2)

En forma sólida, la riboflavina es de color amarillo anaranjado intenso. En solución acuosa,tienen una fluorescencia amarillo-verdosa muy intensa. En solución alcalina, es soluble con facilidad, pero es bastante inestable al calor, y a la luz forma lumifavina, un producto de degradación fluorescente que carece de actividad biológica. Las soluciones de ribofavina tiene una fluorescencia amarillo verde característica, con una absorción máxima en 565nm en el rango de pH ácido.(3)

OBJETIVOS

Conocer el manejo de un fluorómetro de filtros.

Determinar el efecto del pH del disolvente sobre la intensidad de fluorescencia.

Determinar el efecto de la concentración de riboflavina en la intensidad de fluorescencia.

RESULTADOS

Tabla 1. Resultados de la curva de calibración de riboflavina en diferentes medios.

Riboflavina

(ppm) Intensidad de Fluoresencia en H2O Intensidad de Fluoresencia en HCl 0.1M Intensidad de Fluorescencia en CH3COOH 0.9M Intensidad de Fluoresencia en NaOH 0.1M

0 5.02 4.76 4.96 4.97

1 5.86 5.13 5.9 4.99

2 7.25 5.28 6.74 5

3 8 5.42 7.58 5.01

4 9.29 5.57 7.96 5.02

5 10.17 5.69 9.04 5.03

10 13.87 6.25 12 5.08

50 20.37 7.07 17.16 5.12

pH 6 13 3 13

Nota: Los resultados se obtuvieron en el Fluorometer Jenway 6270

Explique como afectan las concentraciones a la intensidad de fluorescencia.

Ya que se puede aplicar al fenómeno de fluorescencia la Ley de Beer, la intensidad de la radiación fluorescente es proporcional a la concentración de la sustancia en solución (4) , y por lo tanto, como podemos ver en la tabla 1, a mayor concentración de riboflavina mayor es la intensidad de Fluorescencia.

Figura 1.Curva de calibración de Riboflavina en diferentes disolventes en concentraciones de 0 a 5 ppm.

Disolvente H2O HCl 0.1M CH3COOH 0.9M NaOH 0.1M

Ecuación de la recta y Coeficiente de correlación (r) y=1.0511x+4.9705

r2=0.9953

r=0.9976 y=0.1746x+4.8719

r2=0.9525

r=0.9759 y=0.7834x+5.0714

r2=0.9896

r=0.9947 y=0.0114x+4.9748

r2=0.9953

r=0.9976

Tabla 2. Ecuación de la recta y Coeficiente de Correlación de cada disolvente en concentraciones de 0 a 5 ppm.

Figura 2 .Curva de Calibración de Riboflavina en diferentes disolventes de 0 a 50 ppm.

Tabla 3. Ecuaciones de la recta y Coeficiente de correlacion de cada disolvente en concentraciones de 0 a 50 ppm.

Disolvente H2O HCl 0.1M CH3COOH 0.9M NaOH 0.1M

Ecuación de la recta y Coeficiente de correlación (r) y=1.0511x+4.9705

r2=0.9953

r=0.9976 y=0.1746x+4.8719

r2=0.9525

r=0.9759 y=0.7834x+5.0714

r2=0.9896

r=0.9947 y=0.0114x+4.9748

r2=0.9953

r=0.9976

Disolvente H2O HCl 0.1M CH3COOH 0.9M NaOH 0.1M

Ecuación de la recta y Coeficiente de correlación (r) y=0.2773x+7.3795

r2=0.8499

r=0.9219 y=0.0385x+5.285

r2=0.7969

r=0.8926 y=0.2195x+6.8601

r2=0.8571

r=0.9257 y=0.0026x+5.0035

r2=0.7431

r=0.8620

Disolvente H2O HCl 0.1M CH3COOH 0.9M NaOH 0.1M

CÁLCULOS

Para preparar la solución madre de 50 ppm de riboflavina.

100mL1 mg(1ppm)

250mL0.25mg

A 50 ppm

(0.25mg) x (50 ppm) = 12.5

12.5 mg/ 1000 = 0.0125 pesados para preparar la solución madre.

PREGUNTAS ADICIONALES

1.-¿Por qué se deben conocer las longitudes de onda de máxima excitación y de máxima emisión?

Porqué para hacer una determinación cuantitativa de un compuesto por fluorescencia

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