Laboratorio

Laboratorio

Materiales

• Microscopio

• Portaobjetos

• Cubreobjetos

• Frasco lavador

• Agua

• Mechero Bunsen

• Alcohol Acetona

• Cronometro

• Cristal violeta

• Lugol

• Safranina

• Aceite de inmersión

Procedimiento

1. Tomar muestra de oro faringe y se observa células procariotas y células eucariotas

2. Cubrir la preparación (placa) Fijada con CRISTAL VIOLETA para Gram por un minuto.

3. Lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua

4. Cubrir la preparación (placa) con LUGOL (Solución yodo/yoduro) para Gram por un minuto.

5. Lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua

6. Decolorar la placa con ALCOHOL ACETONA solución decolorante para Gram por 15-30 Segundos Hasta que la placa decolore totalmente.

7. Lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua

8. Cubrir la preparación (placa) con FUCSINA O SAFRANINA para Gram por un minuto.

9. Lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua, dejar secar al aire

10. Examinar en el microscopio con lente de 10X y después con 100X

Resultados

• Coco Gram Positivas

• Coco Bacilos Gram negativos

Conclusión

Después de haber realizado todos los pasos pudimos observar en el microscopio Baterías Coco Gram positivas y Bacilos Gram negativos, al centro de la célula epitelial.

Las Coco Gram positivas tomaron un color violeta, y los cocobacilos Gram negativos un color rosado, los coco Gram positivas se caracterizan por que las células epiteliales están tachadas por los cocobacilos.

Explicación del laboratorio

El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas) a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales están presente para solubilizar el yodo, y actúan de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta. La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen.

Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules. La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al término del protocolo, las Gram positivas

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