Numeracion Dde Coliformes

“Año de la Promoción de la Industria Responsable y del Compromiso Climático”

FACULTAD DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

ESCUELA DE BROMATOLOGIA Y NUTRICION HUMANA

INFORME N° 03

 DOCENTE:

• Blga. Jessy Patricia Vásquez Chumbe Mgr,

 ALUMNA:

• Del Aguila Benavides, Miryam

 CURSO:

• Microbiología de Alimentos

 CICLO:

• 3

 SEMESTRE:

• 6

 FECHA DE PRESENTACION:

• Viernes 13 de Junio

 AÑO:

2014

TITULO: “NUMERACION DE COLIFORMES, COLIFECALES Y E. COLI”

1. OBJETIVOS

o Determinar la calidad sanitaria de un alimento a través de la técnica NMP o tubos múltiples.

2. INTRODUCCION

Los microorganismos indicadores de la contaminación fecal, principalmente son: Coliformes,' Colifecales, Escherichia Coli, Enterobacterias totales, y Streptococcus del grupo D de Lancefield; por cuanto normalmente se les encuentra en el tracto digestivo del hombre y de animales de sangre caliente.

A) COLIFORMES. El término coliforme, comprende los géneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, y Citrobacter, y se caracterizan por utilizar la lactosa como fuente de carbono. Los Coliformes distintos a la E. Coli, persisten en el suelo o sobre las superficies, tales como los granos, frutas y otros productos del campo.

B) COLIFECALES. Son un grupo de microorganismos procedentes de la incubación del inoculo a la temperatura de 44 a 45.5° C, que contienen por lo general un alto porcentaje de E. coli tipo I y II, por lo que son muy indicativos de la contaminación fecal.

C) ESCHERICHIA COLI. Este microorganismo habita naturalmente en el tracto digestivo del hombre y de otros animales de sangre caliente.

La presencia de este microorganismo en un alimento dado se interpreta como contaminación directa o indirecta de origen fecal, por lo que se considera a la E. Coli como el indicador clásico de la presencia simultánea de bacterias patógenas entéricas, entre ellas, Salmonella tiphy, otras salmonellas, Shigella vibrios, parásitos diversos, y virus entéricos.

Sin embargo la presencia de E. Coli en un alimento no indica que existan también necesariamente gérmenes patógenas, sino simplemente advierte el riesgo de que pudieran estar presentes.

3. MATERIALES Y METODOLOGIA

a. Materiales y Reactivos:

 Requisito: preparación y dilución de las muestras de alimentos (Método 1/ISO de la Práctica de Homogenización y Dilución).

 Placas Petri

 Pipetas Bacteriológicas

 Incubadora regulada a 35° - 37°C

 Asa de inoculación

 Caldo Lauril Sulfato (LST)

 Caldo Brilla

 Agar ENDO y VRBA

 Agar Mac Conkey

 Agar Citrato de Simmons

 Agar HiCrome coliforms

 Caldo E. Coli

 Caldo Glucosa

 Caldo Triptona

 Solución Rojo de Metilo

 Reactivo de Vogues Proskaver

 Reactivo de Kovacs

 Baño termostático 44.5°C

 Mandil, guantes, mascarilla y gorro desechable.

 Muestra de Alimento: ‘Hamburguesa casera’

b. Procedimiento:

A. Coliformes Totales

i. Preparar las muestras de alimentos según el método 1/ISO de las diluciones necesarias según el grado de contaminación de alimento.

ii. Pipetear 1 ml a partir de las diluciones en tubo de Caldo Lauril Sulfato, utilizando 3 o 5 tubos por dilución. Uncubar a 35° - 37°C x 24 – 48 horas.

iii. Anotar los tubos que muestran la producción de gas. (Prueba presuntiva).

iv. De cada tubo que contiene gas transferir con un asa bacteriológica a tubos que contienen Caldo Brilla, o aislar sobre placas con Agar ENDO. Incubar a 35° - 37°C x 24 - 48 horas.

v. Confirmar la presencia de bacterias coliformes por:

a) Formación de gas en el Caldo Brilla

b) Formación de colonias rojas de halo roja en agar ENDO

c) Anotar el número de tubos confirmados, referirse a la tabla del NMP para expresar el resultado

B. Coliformes Fecales

1) Tomar los tubos de Caldo Lauril Sulfato gas positivo procedente del método anterior.

2) Inocular una azada de cada uno de los tubos seleccionados, en tubos de Caldo E. Coli

3) Incubar los tubos de Caldo E. Coli a 44,5°C ± 0,1°C por 24 – 48 horas en Baño María.

4) Terminado el periodo de incubación, observar la formación de gas, y remitirse a la tabla de NMP para registrar los resultados.

C. E. Coli

1) Sembrar por estría de cada tubo de caldo positivo de gas de la determinación de Coliformes de origen fecal, en Agar ENDO o Mac Conkey. Incubar por 24 horas a 35° - 37°C.

2) Tomar una colonia típica (rojas con halo rojo, con o sin brillo metálico) de cada placa y resembrarla por estría en Agar Nutritivo o PC x 24 horas a 35° - 37°C.

3) Seleccionar colonias individuales y sembrar en agar nutritivo inclinado o PC y en caldo lactosado. Incubar por 24 horas a 35° - 37°C.

4) A partir de los cultivos gas positvo en Caldo Lactosado, hacer tinción de Gram, para confirmar la presencia de bacilos Gram – no esporulados.

5) De los cultivos de Agar Nutritivo o PC inclinado de 24 horas, realizar la prueba IMVIC:

a) Indol (KOVACS. 1928)

- Inocular tubos de Caldo Triptona o Peptona con los cultivos puros en incubar a 35° - 37°C x 24 horas.

- Añadir a cada tubo 0,2 – 0,3 ml del Reactivo de Kovacs y agitar.

- Esperar 10 min y observar los resultados. Si aparece un anillo color rojo oscuro o grosella en la superficie de la capa, la prueba es positiva (+). Si es color naranja es reacción ±, y amarillo (-).

b) Prueba de Rojo de Metilo

- Inocular los tubos de Caldo Glucosado o Caldo MRVP, a partir de cultivos puros e incubar a 35° - 37°C x 5 días.

- Añadir 5 gotas de solución de rojo de metilo a cada tubo. Agitar.

- Anotar como positivo si aparece un color rojo. Negativo si es color amarillo, colores intermedios indican reacción dudosa.

c) Prueba de Voges Proskauer

- Inocular tubos de caldo glucosado o MRVP a partir de cultivos puros e incubarlos a 35° - 37°C x 48 horas.

- Añadir el reactivo para la prueba de Voges Proskauer (0,6 ml de solución alfanaftol y 0,2 ml KOH al 40%).

- Agitar los tubos y dejar

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