PRUEBA DE NINHIDRINA.

PRUEBA DE NINHIDRINA

Esta prueba se utiliza para la identificación de α-L-aminoácidos, en esta reacción intervienen dos moléculas de ninhidrina por cada molécula de aminoácido, se produce la liberación de CO2 (g), NH3 y se forma un complejo de color violeta conocido como Púrpura de Ruhemann que está estabilizado por resonancia. La ninhidrina produce este color independientemente de la estructura del aminoácido original, pues la cadena lateral de los aminoácidos se pierde en forma de aldehído. Por esto esta prueba es positiva para todos los grupos libres, ya sea en aminoácidos, péptidos o proteínas, es por esto que en el caso de un aminoácido libre como la Glicina que posee un grupo carboxilo libre (COOH) adyacente al grupo amino. En el caso de la leche de vaca y la pasteurizada (colanta), también dan positiva a esta prueba, debido a que el grupo amino del aminoácido N-terminal de la proteína de la leche (Caseína, la cual tiene aminoácidos libres como lisina, Lucina, entre otros) reacciona con la ninhidrina formando el complejo de color violeta. De igual manera se determina que la albúmina por ser una proteína del huevo y tener aminoácidos como alanina, Serina, entre otros, también da positiva esta prueba.

PRUEBA DE HOPKINS – COLE

Esta prueba se utiliza para identificar proteínas que contengan triptófano, este aminoácido es el único que tiene un grupo indol presente (anillo de seis miembros (benceno) unido a otro de cinco miembros (pirrol). El anillo del indol reacciona con ácido Glioxálico en presencia de ácido sulfúrico concentrado para formar un complejo color violeta, el cual es formado por el carbocatión formado. Esta reacción es de deshidratación. Para la leche de vaca y la pasteurizada (colanta) dio positiva pues efectivamente la proteína de esta es la caseína y uno de los aminoácidos que la conforman es el triptófano e igualmente siendo positiva para la albúmina, la cual también contiene triptófano. Para la Glicina da negativa pues este es un aminoácido mas no una proteína, por lo cual no contiene otro aminoácido.

PRUEBA DE EHRLICH

Esta prueba se utiliza para identificar los aminoácidos que contengan en su cadena lateral anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados, estos reaccionaran con ácido sulfanílico y el nitrito de sodio en medio acido formando sales de diazonio fuertemente coloreadas, permitiendo así detectar la presencia de anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados. La Tirosina da positiva esta prueba pues este es un aminoácido, el cual tiene un anillo aromático fenólico en la cadena lateral. Para la leche también da positiva, este por ser proteína está conformado por gran número de aminoácidos y entre esos esta la Tirosina. Y así igualmente para la albúmina que también la tirosina conforma esta proteína.

PUNTO ISOELÉCTRICO

Se determinó un pH para la leche de vaca tanto para la leche pasteurizada (COLANTA) con un valor de 6, este me indica el punto isoeléctrico, es decir, la carga neta es igual a cero, y la proteína (Caseína) no se desplaza en  el campo eléctrico. De acuerdo a la teoría, se encontró que el PI  de la caseína es 4.6, se puede decir que se presentaron errores en el momento se realizar este proceso como no agregar las suficientes gotas de ácido acético.

DESNATURALIZACION DE PROTEINAS

La desnaturalización de una proteína se refiere a la ruptura de los enlaces que mantenían sus estructuras cuaternaria, terciaria y secundaria, conservándose solamente la primaria. En estos casos las proteínas se transforman en filamentos lineales y delgados que se entrelazan hasta formar compuestos fibrosos e insolubles en agua, además se cambia la estructura tridimensional de la proteína, se pasa de una forma nativa donde hay actividad biológica a una forma más simple done ya no hay actividad biológica y ya no se puede recuperar. Existen muchas formas para desnaturalizar una proteína: una puede ser el cambio de temperatura, al calentar la albúmina (clara de huevo) se produce el despliegue de esta y se precipita, en el laboratorio no se pudo determinar a qué temperatura la albúmina coagulo, por razones de tiempo o insuficiencia de calor. Otra forma para desnaturalizar seria agregando etanol, este hace que las cadenas de proteína se desenrollen y se formen enlaces que unen cadenas con otras. También al agregar NaOH a la albúmina  se determina que se desnaturalizo por la formación del solido blanco, es decir, en solución básica los grupos amino se desprotonan, perdiendo su carga iónica y causando cambios conformacionales. Al adicionar HCL a la albúmina, es decir, sujetar a pH acido, algunos de los grupos carbonilo de las cadenas laterales se protonan y pierden su carga iónica que provocan la desnaturalización.

...