Pruebas Generales Para Aminoacidos Y Proteinas

PRUEBAS GENERALES PARA AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

RESUMEN

Para reconocer la presencia de aminoácidos o proteínas en diferentes muestras, tales como Asparagina, Fenilalanina, Urea, Glicina, Histidina, Tirosina, Gelatina, Agua, Muestra Problema (Triptófano), se llevaron a cabo cinco pruebas diferentes: La Reacción Xantoproteica, Prueba de Biuret, Prueba de Ninhidrina, Reacción de Hopkins – Cole, y Reacción de Ehrlich, en las cuales se identificaron las muestras por los cambios que presentaban respecto a solubilidad, y cambios de color.

1. PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS

1.1. Preparación de soluciones

1.2 Cada prueba se efectuó para nueve muestras diferentes con tubos de ensayos, así:

1. Asparagina

2. Fenilalanina

3. Urea

4. Glicina

5. Histidina

6. Tirosina

7. Gelatina

8. Agua

9. Muestra Problema

1.2.1 Reacción Xantoproteica. Se añadió lentamente 0.5 mL de HNO3 concentrado a 0.5 mL de la solución de proteína o aminoácido. Se calentó en un baño de agua de ebullición durante 5 minutos. Luego se enfrió la solución y se añadió 2 gotas de solución al 40% NaOH.

Resultados Obtenidos:

N° PRUEBA + HNO3 +Calentados en un baño de agua + NaOH

1 Asparagina

NEGATIVA Soluble – No presento cambio de coloración.

2 Fenilalanina

NEGATIVA Soluble - No presento cambio de coloración.

3 Urea

NEGATIVA Precipito la Urea

4 Glicina

NEGATIVA Soluble – No presento cambio de coloración.

5 Histidina

NEGATIVA Soluble – No presento cambio de coloración.

6 Tirosina

POSITIVA Soluble – Presento cambio de color a Amarillo.

7 Gelatina

NEGATIVA Soluble – Presento cambio de color a un amarillo muy pálido

8 Agua

NEGATIVA Soluble - No presento cambio de coloración.

9 Muestra Problema

POSITIVA Soluble – Presento cambio de color a Amarillo Intenso (más oscuro con respecto al de la Tirosina).

Cuando las muestras de Tirosina y Muestra Problema que ahora la definiremos como Triptófano por los resultados obtenidos, tuvieron contacto con la solución alcalina (2 gotas de solución al 40% NaOH), el cambio de color en la escala de amarillos se intensifico en ambas, lo que no sucedió con la gelatina que tuvo un cambio aparente de color con el Ácido Nítrico Concentrado, pero, con la adición de la solución alcalina no se notó cambio en la coloración.

1.2.2 Prueba de Biuret. Se añadió 0.5 mL de solución concentrada de NaOH a 1 mL de la solución de proteína o aminoácidos y se mezcló…

Nota: la muestra ocho (8) que corresponde al agua, se cambió, porque al apreciar la foto se observa que el tubo de ensayo no estaba bien limpio y contamino la muestra.

Luego se añadió una gota de CuSO4 al 5%...

y se agitó…

Resultados Obtenidos:

1.2.3 Prueba con Ninhidrina. Se añadió 3 gotas de la solución de Ninhidrina a 0.5 mL de la solución de proteína.

Resultados Obtenidos:

N° PRUEBA + Solución de Ninhidrina

Asparagina No presento cambio de color. – Transparente

2 Fenilalanina No presento cambio de color. – Transparente

3 Urea No presento cambio de color. – Transparente

4 Glicina Presento cambio de color a Azul Oscuro.

5 Histidina Presento cambio de color a Violeta Intenso.

6 Tirosina No presento cambio de color. – Transparente

7 Gelatina Presento Coloración levemente roja.

8 Agua No presento cambio de color. – Transparente

9 Muestra Problema Presento Coloración un poco más amarilla, respecto a su coloración normal.

Luego se calentó suavemente hasta observar un cambio de color…

N° PRUEBA + Solución de Ninhidrina+Calentadas

1 Asparagina Presento cambio de color a amarillo claro.

2 Fenilalanina Presento un cambio de color a amarillo claro.

3 Urea No presento cambio de color. – Transparente

4 Glicina Presento cambio de color a Violeta Intenso.

5 Histidina Se oscureció mas – Violeta intenso

6 Tirosina Presento un cambio de color a amarillo.

7 Gelatina Presento cambio de color a Violeta Intenso.

8 Agua No presento cambio de color. – Transparente

9 Muestra Problema Presento cambio de color - Anaranjado

7.2.4 Reacción de Hopkins - Cole. Se añadió 0.5 mL de la solución de proteína 2 mL de ácido acético, luego se inclinó el tubo y se agregó cuidadosamente deslizando por las paredes y sin agitar 0.5 mL de H2SO4 concentrado.

Resultados Obtenidos:

Al realizar esta prueba no se observó cambio en la coloración de las muestras de la uno hasta la ocho, la única que experimento cambio fue la muestra nueve que corresponde a la Muestra Problema= Triptófano, se formó un anillo a nivel de la superficie, y se logró observar la separación de dos líquidos, lo cual es indicador de la presencia del anillo de Indol.

7.2.5 Reacción de Ehrlinch. Se mezcló 0.5 mL de solución de Ácido Sulfanilico con 0.5 mL de nitrito de sodio al 0.5%.

Resultados Obtenidos:

Se dejó reposar esta mezcla durante 15 minutos y se añadió 0.5 mL de muestra y se alcalinizó con unas gotas de Hidróxidos de Amonio al 10%.

2. ANÁLISIS DE RESULTADOS

• REACCIÓN XANTOPROTEICA

Referente Teórico: La reacción es debida a la nitración del anillo bencénico con el ácido nítrico concentrado, para dar productos de color amarillo, que se tornan anaranjados al añadir álcali, debido a la formación de sales.

En las condiciones de experimento solo la tirosina

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