Reacciones febriles

OBJETIVO:

Realizar las reacciones febriles con el fin de identificar la presencia de anticuerpos y dar el diagnóstico serológico de algunas enfermedadesbacterianas.

INTRODUCCIÓN:

La prueba se basa en una reacción inmunológica entre los anticuerpos séricos y el antígeno correspondiente produciendo una reacción de aglutinación(reacción de aglutinación antígeno- anticuerpo) macroscópica.

TÉCNICA:

Para esta prueba existen dos técnicas que se pueden realizar las cuales son:

Método de Titulación en Tubo y Método de Prueba Rápida en Tubo.

MÉTODO DE PRUEBA RÁPIDA EN PLACA

Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antígeno que se esté usando.

NOTA:El reactivo así como los sueros, deben alcanzar la temperatura ambiente para comenzar la prueba.

1. Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades del suero a analizar: 0.08 ml, 0.04 ml, 0.02ml, 0.01 ml y 0.005 ml

2. Agitar el antígeno a utilizar para tener una suspensión uniforme.

3. Añadir 30 μl de la suspensión de antígeno a cada una de las diferentes cantidades de suero. Se recomienda utilizar pipetas automáticas (el gotero incluido proporciona una gota de 30-40 μl).

4. Mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las cantidades de suero.

5. Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecánico (120 rpm) durante 2 minutos.

6. Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinación macroscópica.

7. Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo.

MÉTODO DE TITULACIÓN EN TUBO:

Mezcle bien la suspensión de antígeno mediante agitación suave; prepare una dilución 1:20 del antígeno a utilizaren solución salina.

1. Colocar 7 tubos de 13 x 100 mm en una gradilla para cada antígeno a probar, marcándolos del 1 al 6 y el tubo 7como control.

2. Añadir al tubo 1, 0.9 ml de solución salina y 0.5 ml a los 6 tubos restantes.

3. Añadir 0.1 ml del suero a probar al tubo número 1, mezcle bien y transfiera 0.5 ml al tubo número 2.

4. Continúe esta operación hasta el tubo número 6, eliminar 0.5 ml de esta dilución. El tubo 7 (Control negativo) tendrá únicamente solución salina.

5. Añadir 0.5 ml del antígeno diluido 1:20 a cada uno de los 7 tubos.

6. Agitar bien la gradilla para mezclar el antígeno y el suero e incubar en baño de agua.

7. Después de la incubación, saque la gradilla que contiene los tubos del baño y observe la aglutinación. La utilización de una fuente de luz directa contra un fondo negro dará mejores condiciones para la lectura.

8. Registrar los resultados como sigue:

4+ Todos los organismos 100% aparecen sedimentados en el fondo del tubo y el sobrenadante es totalmente claro.

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