Análisis de Macromoléculas: Electroforesis y cromatografía

Análisis de Macromoléculas: Electroforesis y cromatografía

Laura Sofía Loaiza García

Joan Manuel Martínez Pérez

Esteban Ramírez Gutiérrez

Melany Andrea Ramírez Salazar

Manuela Restrepo Mazo

Informe de laboratorio N° 2

Profesor

Luis Carlos Burgos Herrera

Docente Facultad de Medicina

Universidad de Antioquia

Facultad de Medicina

Medellín

2018

Tabla de contenido

1. INTRODUCCIÓN        3
2. MARCO CONCEPTUAL        4

1. Electroforesis        4
2. Cromatografía        6

1. OBJETIVOS        7

1. Objetivo general        7
2. Objetivos específicos        7

1. METODOLOGÍA        8

1. Materiales y utensilios - Electroforesis (Parte A)        8
2. Procedimiento        12
3. Flujograma        13
4. Materiales y utensilios – Cromatografía (Parte B)        14
5. Procedimiento        16
6. Flujograma        16

1. RESULTADOS        17

1. Resultados electroforesis        17
2. Resultados cromatografía        17

1. ANÁLISIS        20

1. Electroforesis (Parte A)        20
2. Cromatografía (parte B)        22

1. CONCLUSIONES        26
2. ANEXOS        27

1. Cálculos        27
2. Fichas de seguridad        28
3. Mapa de electroforesis        45
4. Referencias        46

INTRODUCCIÓN

En esta práctica de laboratorio se trabajaron dos procesos de separación de moléculas diferentes, en las cuales se apreciaran dos formas diferentes de análisis y en cada una se aprecia una finalidad específica.

En la primera parte (parte A)  se realizó un trabajo de separación de moléculas  por electroforesis en gel, con este analizamos dos muestras de suero diferente; una de control, en la que se pueden ver la concentración normal de cada “componente” de la sangre y otra alterada, de un paciente con el cual apreciaremos diferentes tipos de patologías, de acuerdo a la alteración de determinadas proteínas presentes en la sangre.

En la segunda parte (parte B) se realiza un proceso diferente de separación, un proceso en el cual se puede describir los componentes de determinada sustancia de acuerdo a su separación de color, los colores en los cuales se descompone; esto es conocido como cromatografía. Para nuestra cromatografía utilizamos pigmentos vegetales como café y brócoli, y algunos compuestos inorgánicos como fucsina, verde brillante y fucsina más verde brillante, todos trabajados en dos diferentes disolventes, agua y MAE.

Aunque los dos procesos son en su práctica bastante diferentes, este laboratorios nos permite abarcar de una manera más específica la importancia y las propiedades de la composición de las sustancias, como en el plasma de la sangre con el proceso de electroforesis, y con la cromatografía que podemos ver los diferentes componentes que tiene determinada sustancia de acuerdo a la separación del color.

MARCO CONCEPTUAL

• Electroforesis

La electroforesis es una técnica de separación, en el cual las partículas eléctricamente cargadas son sometidas a un campo eléctrico. Estas partículas  finalmente se separan y migran hacia un polo positivo (ánodo) o hacia un polo negativo (cátodo), de acuerdo a su carga eléctrica, peso molecular (PM) y tamaño. La mayoría de las biomóleculas poseen una carga eléctrica cuya magnitud depende del pH del medio en el que se encuentran; como consecuencia, pueden desplazarse cuando se ven sometidas a un campo eléctrico hacia el polo de carga opuesta al de la molécula1.

Las diferentes técnicas electroforéticas sirven como método de separación de macromoléculas complejas como los ácidos nucleicos y proteínas. Para el caso de mezclas complejas, la técnica más utilizada es aquella donde se utiliza como base o matriz una clase de gel específico, el más conocido corresponde al gel de agarosa o poliacrilamida. Los geles son un soporte idóneo pues permiten separar moléculas con gran facilidad en función de su carga, además de soportar varios niveles de temperatura manteniendo aun así su aspecto sólido; estos geles facilitan el movimiento de las partículas a través de un tipo de malla o micro poros, los cuales hacen parte de la composición del gel.

El movimiento o migración de las partículas dependen en gran medida de la velocidad ejercida por la fuerza a través de los electrodos al igual que por el tamaño de las mismas, es decir, cuanta más pequeña sea la molécula su desplazamiento se dará con mayor facilidad. Por consiguiente, la velocidad de migración electroforética depende de la densidad de carga de la molécula (relación carga / peso), del voltaje aplicado y de la porosidad del gel de electroforesis2.

Por medio de la electroforesis en gel se realiza el análisis de proteínas en suero humano, dicho análisis es de suma importancia y de gran utilidad clínica, pues las proteínas son las macromoléculas más importantes del organismo, ya que ocupan un lugar central en el flujo de información, es decir, ejecutan toda la información del DNA; además, participan en múltiples procesos y funciones estructurales, de transporte, de control metabólico y demás.

Esta es una técnica comúnmente utilizada en laboratorio, especialmente analiza aquellas proteínas que se encuentran en el suero o plasma sanguíneo humano; dichas proteínas se encuentran clasificadas en diferentes fracciones tales como la albúmina y globulinas, y estas a su vez se dividen en: albúmina, alfa-1, alfa-2, beta y gammaglobulinas, representadas así respectivamente:

• Albúmina
• [pic 1]
• [pic 2]
• [pic 3]
• [pic 4]

Cabe destacar que esta técnica bien utilizada es una excelente prueba de tamización, que como el hemograma y el citoquímico de orina, le permite al médico una visión global de la composición de las proteínas del paciente y mediante las alteraciones identificadas en ella, orientar con mayor racionalidad  y oportunidad un diagnostico3.

...