Análisis microbiológico de agua potable

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE AGUA POTABLE

1. Controles de primer nivel

1. Antes del análisis

Antes de empezar el análisis, se debe comprobar que todos los materiales y equipos necesarios se ajustan y cumplen los requisitos descritos en los procedimientos normalizados de trabajo. Esto afecta a:

Muestras, equipos, medios de cultivo, filtros y reactivos.

1. Durante el análisis

Se deberán examinar y registrar si es necesario, todas las observaciones que se realicen durante la ejecución de los análisis.

1. Además del análisis

En las series de análisis se incluirán nuestras adicionales de características conocidas, con el fin de cubrir con mayor detalle todos los aspectos del proceso analítico.

2. Blancos

Con el fin de evaluar las condiciones de esterilidad a lo largo de todo el proceso analítico, se recomienda emplear muestras blanco en todas las series de análisis; emplear una muestra estéril, por ejemplo agua estéril o diluyente y, someterlo al mismo proceso que las muestras analizadas, incluyendo posibles diluciones, pipeteo, filtración, incubación, etc.

3. Preparación y recolección de muestras

1. Identificación de la muestra

-Fecha y hora de recolección.

-Número o código de la muestra.

-Descripción de la muestra.

-Temperatura a la cual se encuentra la muestra.

-Nombre y dirección del productor.

-Lugar de recolección.

-Razón del análisis.

-Nombre y cargo del muestreador.

b) Equipo básico de muestreo

1.- Recipiente de envío. Hielera con hielo seco o en bolsa (para evitar la contaminación de la muestra).

2.- Marcador indeleble.

3.-Guantes, etiquetas, cinta adhesiva o tiras para cerrar.

4.- Tubos y botellas estériles.

5.- Bolsas para muestreo (de tamaño adecuado y una prueba de enjuague de <1UFC/ml).

6.- Espátulas, cucharas, abatelenguas estériles.

7.- Torundas estériles, tubos con agua peptonada estéril (APE) 0.1%.

8.- Termómetro que pueda ser sanitizado en solución de hipoclorito de sodio antes del muestreo.

9.- Bactericida (alcohol 70%)

10.- Pipeta estéril.

C) Proceso de muestreo

Abrir la llave o tubo y dejar correr el agua por dos minutos. Llenar la bolsa de muestreo hasta tres cuartas partes (debe utilizarse pastilla de tiosulfato de sodio en caso de agua clorada) y transportarla en frío al laboratorio.

La muestra debe llegar al laboratorio y ser analizada en un periodo máximo de 36 horas en estado de refrigeración.

1. Preparación de la muestra

Mezclarla 25 veces para homogenizar toda la muestra. No debe transcurrir más de tres minutos entre la mezcla de la muestra y su preparación.

4.- ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO

TÉCNICA DE NÚMERO MÁS PROBABLE

El análisis microbiológico del agua puede hacerse utilizando la técnica de NMP (número más probable) donde es obligatorio usar series de 5 tubos. Como medio de enriquecimiento se utiliza caldo lauril sulfato o caldo lactosado (éste es menos selectivo que el anterior, por lo tanto, beneficioso en el caso de que las bacterias estén lastimadas). En el caso de agua de buena calidad microbiológica y con el fin de verificar potabilidad, se debe emplear una serie de 5 tubos de caldo doble concentración (10 ml), en el que se inocularán 10 ml de la muestra de agua. En la serie siguiente se inocula 1 ml y 0.1 ml por serie (caldo lactosado simple).

La fase confirmatoria se realiza en caldo bilis verde brillante (CBVB) para coliformes totales y caldo EC (Escherichia Coli) para coliformes fecales, que se incuba a 35 grados ± 1 °C durante 48 horas y los tubos con gas y crecimiento bacteriano se interpretan como coliformes totales g o ml.

FILTRACIÓN EN MEMBRANA

La muestra de agua también se puede montar por esta técnica, para lo cual se necesita un tipo de embudo, Kitasato, prensa y bomba de vacío. El embudo debe estar estéril y ser diferente para cada muestra. También se necesita un filtro milipore (0.45 ó 2.22 um) estéril. Se recomienda filtrar la siguiente cantidad de agua: 50 ml.

Luego de filtrar el agua, se coloca el filtro en una almohadilla estéril recubierta con medio M Endo, la cual se incuba a 35 ± 1 °C durante 24 ± 2 horas en ambiente húmedo.

Las colonias típicas de coliformes son rosadas o rojas con brillo metálico en la superficie (no deben de haber más de 50 colonias/placa).

COMPARACIÓN DE LA TÉCINA NMP Y FILTRACIÓN EN MEMBRANA

Materiales

-Muestra de agua potable y no potable

-Botella 90 ml agua peptonada estéril

-Tubos 9 ml APE

-Tubos caldo lactosado doble + campana Durham

-Tubos caldo lactosado simple + campana Durham

-Tubos caldo Bilis Verde Brillante + campana Durham

- Tubos caldo EC + campana Durham

-Tubos caldo triptona

-Reactivo de Xilol

-Reactivo de Ehrlich

-Equipo de filtración

-Filtro Millipore 0.22 um estéril

-Placas Petri pequeñas

-Almohadillas estériles

-Medio M Endo

-Pinzas estériles

-Incubadora 44.5 grados o baño maría a la temperatura citada

-Placas agar Levine

PROCEDIMIENTO

1.- A partir del agua potable, montar 10 ml en tubos de caldo lactosado doble y 1 y 0.1 ml en caldo lactosado simple (series de 5). Incubar 48 horas a 35 °C.

2.- A partir de agua no potable, realizar diluciones desde 10 -1 hasta 10 -6 Montar 1 ml de cada dilución en series de caldo lacosado simple. Incubar 48 horas +-3 horas a 35 +- 1 °C.

3.- De cada tubo que presente gas, inocular un tubo de CBVB (35°C +- 1, 48 horas +- 3horas) para coliformes totales y 1 de caldo EC (44.5 grados +- 0.2 grados, 24 +- 2 horas) para coliformes fecales.

4.- A los coliformes fecales realizarles la prueba de indol y agar Levine.

5.-Reportar según la tabla de NMP para agua.

6.-Filtrar el agua potable. El filtro colocarlo sobre una almohadilla empapada en medio M Endo. Incubar 24 horas +- 2 horas a 35 grados +- 1°C.

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