ANALISIS MICROBIOLOGICO DE UNA MUESTRA DE AGUA

ANÁLISIS MICROBIOLOGICO DE UNA MUESTRA DE AGUA.

Yurbis Zambrano M

Yzambran3@cuc.edu.co

Yarlis Tilano Algarín

Ytirano1@cuc.edu.co

Indira Algarín Molina

Ialgarin2@cuc.edu.co

Margarita Castillo Ramírez

Grupo: AD1

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RESUMEN: En el presente informe se utilizo la técnica de filtración por membrana para poder determinar la calidad microbiológica de una muestra de agua, identificando y observando los microorganismos que se encuentran presente. Este análisis se llevó a cabo en el medio de cultivo Agar SPS (agar sulfito sódico). Donde se tomó 1 ml de la muestra problema y se diluyo en 100 ml de agua destilada, para luego pasar los microorganismos de la población mixta en la que se encuentran, empleando la técnica de filtración por membrana, siembra y medio de cultivo en una caja Petri. Posteriormente se mezcló con el medio SPS fundido y se incubó a 44,5°C durante 24 h para así realizar un recuento de los microorganismos encontrados en el correspondiente medio de cultivo.

Procesos

PALABRAS CLAVES: Coliformes fecales, Coliformes totales, Microorganismos.

ABSTRACT: In this report we use the membrane filtration technique to determine the microbiological quality of a water sample, identifying and observing the microorganisms that are present. This analysis was conducted in the SPS agar medium (agar sodium sulfite). Where 1 ml of the sample is taken and diluted in 100 ml of distilled water, then move the microorganisms in the mixed population in which they are using the membrane filtration technique, planting and growing medium in a box Petri. Subsequently mixed with molten SPS medium and incubated at 44.5 ° C for 24 h in order to make a count of the microorganisms found in the corresponding culture medium.

KEYWORDS: fecal coliforms, total coliforms, microorganisms.

1. OBJETIVOS.

OBJETIVO GENERAL: Analizar la calidad microbiológica de una muestra de agua tomada de una escorrentía del corregimiento de Chorrera, Municipio de Juan de Acosta-Atlántico, mediante la técnica de filtración por membrana, con el fin determinar la presencia de microorganismos patógenos.

OBJETIVOS ESPECIFICOS:

-Evaluar la calidad microbiológica de la muestra de agua.

-Determinar y realizar un recuento de Coliformes fecales mediante la técnica de filtración de membrana.

-Establecer los factores que influyen en la presencia de poblaciones microbianas.

-Realizar diferentes técnicas de tinción para identificar los microorganismos presentes en la muestra de agua.

1. INTRODUCCION.

En todo el mundo las enfermedades causadas por la mala calidad de las aguas son frecuentes, ellas ocurren por diferentes causas como la falta de un tratamiento correcto del agua o por contaminación debido a diferentes factores.

Es así que las características biológicas y microbiológicas del agua vienen regidas por la población de microorganismos acuáticos que alberga y que afectan de un modo importante a su calidad. Algunos de éstos microorganismos pueden dañar la salud humana, dando lugar a las denominadas enfermedades hídricas, de una incidencia especialmente grave en los países en vías de desarrollo, e incluso también en los desarrollados.

De esta manera la microbiología de las aguas se ocupa de las relaciones que mantienen los microorganismos con su medio ambiente y con los demás organismos presentes en el mismo. Los microorganismos más numerosos que pueden albergar las diferentes masas de agua que existentes en nuestro planeta son: bacterias, cianofíceas, hongos, protozoos, algas y virus.

El agua contiene suficientes sustancias nutritivas para permitir el desarrollo de diferentes microorganismos. Muchas de las bacterias del agua provienen del contacto con el aire, el suelo, animales o plantas vivas o en descomposición, fuentes minerales y materias fecales. (Marín, 2003). Y es por esto que se hace necesario establecer sistemas de control que permitan detectar las impurezas y aplicar correctivos en forma oportuna cuando se identifican microorganismos en algún cuerpo de agua. Realizando un análisis microbiológico definido como el conjunto de operaciones encaminadas a determinar dichos microorganismos presentes en una muestra problema de agua [1].

1. FUNDAMENTOS TEORICOS.

3.1 COLIFORMES TOTALES

Son las Enterobacteriaceae y bacilos Gramnegativos aerobios y anaerobios facultativos y conforman un grupo de bacterias que se caracterizan por la capacidad que tiene de fermentar la lactosa produciendo ácido y gas ya que sobreviven a una temperatura de 30°C -- 37°C. Los microorganismos que conforman estos Coliformes son los Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter, etc. Su habitad común es en el intestino del hombre y animales, pero también sobreviven en otros ambientes como aguas, suelos y planta.

Por consiguiente no son útiles como índice de agentes patógenos fecales, pero pueden utilizarse como indicador y evaluar la limpieza e integridad de posible presencia de biopeliculas [2].

3.2 COLIFORMES FECALES O TERMOTOLERANTES.

Son un subgrupo que resisten altas temperatura, comprendidas entre 44°C – 47°C. Estos son microorganismos Grampositivos de origen fecal,entre estos se encuentran la Escherichia Coli, y algunas cepas de Enterobacter, Enterococos y Klebsiella, se utilizan para evaluar la calidad sanitaria del agua y está relacionado con la transmisión de patógenos y por eso se utilizan como indicadores de calidad de agua y son más efectivos que los Coliformes totales ya que su origen es fecal [2].

3.3 FILTROS DE MEMBRANA.

Los filtros de membrana son filtros de superficie, que muestran una estructura microporosa precisa. Durante la filtración las partículas mayores que los poros de la membrana son retenidas de forma fiable en la superficie de la misma. Las partículas más pequeñas pueden pasar el filtro [3].

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Fig. 1: Filtro de membrana.

Fuente: Yurbis Zambrano

3.4 TÉCNICA DE FILTRACIÓN A TRAVÉS DE MEMBRANA.

El número de coliformes totales presentes en el agua se determina mediante la filtración de volúmenes específicos de la muestra a través de filtros de membrana. Por lo general, están compuestos de esteres de celulosa, típicamente con poros de 0,45 mm de diámetro que retienen los coliformes totales y otras clases de bacterias presentes en la muestra. Después que se incuban las membranas vueltas hacia arriba en un medio selectivo. En la práctica, la técnica de filtración de membrana ofrece resultados comparables a los que se obtienen con el método de tubos múltiples. 

Una de las ventajas del método de filtración a través de membrana es la prontitud con que pueden obtenerse los resultados y, en consecuencia, se pueden llevar a cabo rápidamente acciones correctivas y operar ya sea en las planta de agua de nuevo en forma normal. Esta técnica puede aplicarse en el análisis de casi todos los tipos de agua, también se utiliza en el análisis de leche y otros alimentos líquidos [3].

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Fig. 2: Montaje del Equipo Millopore.

Fuente: www.medicalexpo.es

3.5 VOLUMEN DE AGUA ANALIZADA.

El volumen de muestra a filtrar es generalmente de 100 ml, excepto para aguas envasadas, en las que se recomienda analizar muestras de 250 ml. Sin embargo, en aguas superficiales y en general en aguas naturales sin tratar, el número de bacterias en 100 ml puede variar desde pocas decenas hasta cientos de millares. La siguiente tabla proporciona unos datos que pueden servir de orientación:

Tabla 1: Volumen de la muestra a filtrar

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Las muestras comprendidas entre 30 ml y 250 ml se filtran directamente añadiéndolas al embudo de filtración. 
Para muestras entre 1 y 30 ml, se añaden primero al embudo 20-30 ml de solución tamponada estéril y, encima de ella, se vierte la muestra a filtrar.
Para todas las muestras inferiores a 1 ml, es preciso realizar previamente diluciones con solución tamponada estéril [3].

3.6 MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO PARA COLIFORMES TOTALES: CALDO ENDO, MF.

Se utiliza el Caldo Endo para el recuento de coliformes totales. Este es un medio para el aislamiento selectivo de los coliformes totales pues lleva inhibidores para el resto de microorganismos. El lauril sulfato y desoxicolato que forman parte de la fórmula del medio permite crecer a los coliformes lactosa positivo pero inhibe el crecimiento del resto de bacterias acompañantes. Las colonias lactosa positiva se colorean de rojo por la liberación de fucsina del sulfato de fucsina. Las colonias de E. coli y de los coliformes muestran generalmente un brillo metálico.
Se utiliza este medio para la identificación y recuento de coliformes en agua, leche y otros líquidos mediante filtración sobre membrana y está incluido en las recomendaciones de la APHA "American Water Works Association and Water Pollution Control Federation: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 2004”.
Medio sólido selectivo, que se prepara en placas para filtración de membrana y el Medio líquido selectivo, que se deposita en placas de cultivo que llevan una almohadilla absorbente (aproximadamente 2 ml por placa) [4].

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