Articulo Cientifico

Artículo Científico

Javier Arturo Munguía Xóchihua Froylán Ibarra Velarde

Yolanda Vera Montenegro René Rosiles M.

Antonio Romo Mancillas Jorge Cantó Alarcón

Adriana Ducoing Watty

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Solubilidad de un compuesto con actividad fasciolicida: Evaluación de eficacia in vitro y en ovinos experimentalmente infectados con Fasciola hepatica

Resumen

El compuesto alfa es un derivado bencimidazólico de gran eficacia fasciolicida, que se ingiere vía oral, su solubilización constituye una alternativa para obtener una formulación inyectable. Los objetivos de este estudio fueron: evaluar la solubilidad del compuesto alfa, determinar la eficacia fasciolicida in vitro y en ovinos experimentalmente infectados. Los ensayos de solubilidad que fueron cuantificados mediante cromatografía de líquidos de alta resolución, mostraron que la betaciclodextrina e hidroxipropilbetaciclodextrina solubilizaron en 0.051% y 1.018%. Esta última se evaluó con cinco concentraciones, mostró que a 5.8 mg la solubilidad fue 3.95%; hidroxipropil-betaciclodextrina y metanol, 10.76%; propilén-glicol, 39.048%; glicerol formal, 100%; y glicerol formal con propilén- glicol y agua en proporciones 3:2:5 y 3:2:4, 100%. La evaluación in vitro con fasciolas inmaduras mostró que el compuesto con glicerol formal y la combinación de vehículos a las 24 horas fueron eficaces en 100%. La eficacia in vivo en ovinos mostró que el compuesto alfa a dosis de 1 mg/kg fue de 56.46%, a 2 mg/kg de 68.4% y con sulfóxido del compuesto alfa a 1 mg/kg de 73.9%. No se encontró el compuesto alfa ni sus metabolitos sulfóxido y sulfona en el suero determinado por medio del cromatógrafo de líquidos de alta resolución. Se concluye que a pesar de obtener solubilidad del compuesto alfa y alta eficacia fasciolicida in vitro, los resultados in vivo en ovinos revelaron eficacia moderada.

Introducción

La fasciolosis producida por Fasciola hepatica afecta a varias especies animales, en particular a los rumiantes, en los que ocasiona cuantiosas pérdidas económicas en forma directa cuando mueren jóvenes e indirectas por ocasionar baja de producción de carne y leche, deficiente conversión alimentaria que causa disminución del crecimiento, baja fertilidad y decomiso de hígados en forma parcial o total en los rastros o mataderos.1-3 Para disminuir o evitar estos efectos detrimentales el mejor control es el químico, con ese propósito existen en el mercado diferentes compuestos; de ellos el triclabendazol ha mostrado mayor eficacia en virtud de que elimina tanto a formas juveniles como adultos del trematodo. Sin embargo, la sobreutilización de este compuesto ha generado resistencia de las bacterias en Irlanda y Australia, por lo que se requiere disponer de nuevos compuestos con igual o mayor actividad fasciolicida. En la búsqueda de estas alternativas se sintetizo el compuesto alfa (Ca) o 5-cloro-2-metiltio-6-(1-naftiloxi)-1H-bencimidazol, 5 que ha mostrado alta eficacia fasciolicida in vitro e in vivo por vía oral en ovinos6-8 y en bovinos.9-11 Sin embargo, su solubilidad es mala en agua por lo que es importante realizar esfuerzos para solubilizarlo con el fin de obtener una formulación inyectable.

El uso de vehículos como ciclodextrinas (CD), propalen-glicol (PG) y glicerol formal (GF) pueden aumentar la solubilidad, estabilidad química y biodisponibilidad, modificar la absorción y la concentración del compuesto en sangre de diferentes compuestos.12-13 El compuesto alfa solubilizado e inyectado por vía intramuscular tendrá mayor efecto que cuando se administra vía oral.

Los objetivos de este estudio fueron evaluar la solubilidad y eficacia in vitro del compuesto alfa, así como su eficacia en ovinos experimentalmente infectados.

Material y métodos

Solubilidad del compuesto alfa

Compuesto alfa

El compuesto alfa se sintetizo en el Departamento de Farmacia de la Facultad de Química, de la Universidad Nacional Autónoma de México.

Vehículos

Ciclodextrinas (CD): alfaciclodextrina (α-CD), hidroxipropil-alfaciclodextrina (HP-α-CD), betaciclodextrina (β-CD), hidroxipropil-betaciclodextrina (HP-β-CD) y los cosolventes propilen-glicol (PG) y glicerol formal (GF), que provinieron de fuente comercial.

Solubilidad

Se realizo la formación de aductos del Ca con las CD con el siguiente procedimiento: el Ca (2 mg) se suspendió en una solución acuosa (2 mL/H2O) con cada ciclodextrina (3 mg) por triplicado, se agito durante siete días a temperatura ambiente. La CD que proporciono mayor hidrosolubilidad se evaluó en las concentraciones 5.8, 2.9, 1.45, 0.725, 0.0362 mg con 2 mg de Ca. Se realizaron otros ensayos utilizando HP-β- CD y metanol (MeOH), se evaporo al medio ambiente y se resuspendio en agua, Ca con PG, CPα con GF y la combinación de cosolventes GF con PG y H2O en proporción 3:2:5 y 3:2:4. Se utilizo una concentración de HP-β-CD 3.0 mg y de Ca 2.0 mg en cada ensayo por triplicado; cada muestra se filtro a través de una membrana de acetato de celulosa, para ser inyectado en el cromatografo de líquidos de alta resolución (CLAR). Se determino la solubilidad en forma física

Mediante transparencia de los vehículos con el compuesto y con el uso del CLAR.15-17

Condiciones cromatográficas

Se utilizo un sistema cromatografico con bomba binaria, automuestreador y detector de arreglo de diodos, con 304 nm de longitud de onda. La fase móvil consistió en metanol (40), agua (40) y acetonitrilo (20) en grado CLAR, degasificador en línea con helio. La fase estacionaria consistió en una columna C18 de 80 mm de longitud. La suspensión a evaluar se filtro con membrana 0.45 μm, se inyectaron 25 μL de muestra y el límite de detección del equipo fue de 50 ng/mL. Para el cálculo de la concentración del compuesto se empleo un estándar externo, con el método de adición se determino el porcentaje de recuperación de la técnica analítica para establecer el porcentaje de recuperación del compuesto durante la extracción.

Evaluación in vitro

Preparación de compuestos para evaluación quimioterapéutica

Se utilizaron 10 y 50 mg/L de Ca solubilizado con GF, PG, GF combinado con PG y H2O (3.2:5 y 3:2:4) y 0.5 mg/L con HP-β-CD, que se depositaron en viales de 30 mL de capacidad. Posteriormente se prepararon las diluciones correspondientes con la finalidad de obtener

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