BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR One strange rock

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UNIVERSIDAD INTERAMERICANA DE PANAMA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE CIRUGÍA DENTAL

BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR

Estudiante:

Yuribeth Quiel 8-942-2139

Orlando Delgado 3-745-610

Tema:

One strange rock

Profesora:

Gina de la Togna

Fecha:

27 de abril del 2019

Introducción

En su estado natural, la mayoría de las células y microorganismos que observamos bajo el microscopio carecen de color y contraste. Esto hace que sea difícil, hasta casi imposible, detectar estructuras celulares importantes y sus características distintivas sin tratar artificialmente los especímenes. Debido a esto, se han creado técnicas de tinción que involucran tinturas y tintes fluorescentes, que nos ayudaran a visualizar las muestras de mejor forma y con mayor detalle. De hecho, se han desarrollado numerosos métodos para identificar microbios específicos, estructuras celulares, entre otros, bajo el microscopio.

Para realizar las tinciones, se coloca una cantidad pequeña de muestra del microorganismo sobre un portaobjeto, a este proceso se le denomina frotis. Luego de esto se debe fijar la muestra, esto se logra a menudo por calentamiento (fijación por calor) o por tratamiento químico de la muestra. Además de sujetar la muestra al portaobjetos, la fijación también mata a los microorganismos en la muestra, deteniendo su movimiento y metabolismo mientras preserva la integridad de sus componentes celulares para la observación.

Entre los diferentes tipos de tinciones se encuentran la simple, negativa, selectiva y diferencial.

• Tinción simple: Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tiñen con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol).
• Tinción negativa: las células se dejan sin teñir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células. La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las células, tal como la tinta china (que es una suspensión de partículas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua).
• Tinción selectiva: se usa para observar estructuras como la endospora y utiliza tintes como el verde malaquita.
• Tinción de diferencial: Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitución química. Los ejemplos clásicos sería la tinción de Gram.

• Tinción de Gram:  Es la tinción diferencial más utilizada de forma rutinaria. Proporciona una información esencial, además de sobre la forma, tamaño y divide a las bacterias con pared del Dominio Bacteria en dos grandes grupos: bacterias con pared de tipo gram positiva y bacterias con pared de tipo gram negativa.

Materiales

• asas de inoculación
• alcohol al 70%
• pilotos permanentes
• portaobjetos
• agua destilada
• pinzas
• aceite de inmersión
• cultivos bacterianos
• microscopios ópticos
• guantes de látex
• gradillas para portaobjetos
• lápiz de cera
• mecheros
• fósforos
• juegos de colorantes de Gram
• verde malaquita al 5%
• agua estéril

Métodos

Tinción simple

• Frotis

1. Marcar un portaobjeto en el área donde se colocara la muestra, pero rotular en la cara opuesta y rotular con la cepa microbiana a utilizar.
2. Colocar una gota de agua destilada sobre el portaobjeto en el lado a trabajar.
3. Esterilizar el asa de inoculación en el mechero y esperar a que se seque.
4. Tomar de forma aséptica una pequeña muestra del cultivo.
5. Colocar la muestra en el portaobjeto y extenderla con el asa haciendo movimientos circulares, dejarla secar.

• Fijación

1. Fijar la muestra pasando el portaobjeto dos o tres veces por la flama del mechero con ayuda de una pinza (por el lado donde no están las bacterias)

• Tinción

1. Cubrir la muestra con azul de metileno o safranina y dejar actuar por un minuto.
2. Eliminar el exceso de colorante con agua destilada, colocar portaobjetos sobre papel toalla y esperar a que seque.

• Observación

1. Observar muestra en microscopio en aumentos de 10X, 40X y 100X (utilizar aceite de inmersión).

Tinción de endosporas

1. Hacer frotis de la cepa microbiana a utilizar y fijarlo con calor.
2. Colocar el porta objeto sobre gradilla y cubrir completamente con el colorante verde malaquita.
3. Fijar el colorante con una antorcha de alcohol durante 5 minutos.
4. Enjuagar con agua destilada y cubrir con safranina (para teñir el citoplasma) durante un minuto.
5. Lavar nuevamente con agua destilada y dejar secar sobre papel toalla
6. Observar muestra en microscopio en aumento de 10X, 40X y 100X (utilizar aceite de inmersión).

Tinción de Gram

1. Cubrir frotis de la cepa microbiana a utilizar con el colorante cristal Violeta y dejar actuar durante un minuto,
2. Enjuagar con agua destilada.
3. Cubrir los frotis con lugol y dejar actuar durante 30 segundos.
4. Enjuagar con agua destilada.
5. Cubrir el frotis con alcohol al 96% durante 15 segundos.
6. Enjuagar con agua destilada.
7. Cubrir el frotis con colorante safranina y dejar actuar durante 1 o 2 minutos.
8. Enjuagar con agua destilada y dejar secar sobre papel toalla.
9. Observar muestra microscopio en aumentos de 10X, 40X y 100X (utilizar aceite de inmersión).

Resultado:

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