Bacteriologìa 1. Conocer los componentes fundamentales del microscopio.

Práctica 1

El microscopio compuesto y preparaciones en fresco

Objetivos

1. Conocer los componentes fundamentales del microscopio.

2. Adquirir destreza para el manejo, cuidado y conservación del microscopio.

3. Realizar preparaciones en fresco para la observación de microorganismos.

Introducción

Ciertos pensadores de la antigüedad, para explicar la amplia difusión de diversas enfermedades de un individuo a otro, supusieron la existencia de agentes invisibles capaces de transmitir la infección. Lucrecio (96-55 a.C.), en su poema De rerum natura, reconoció intuitivamente no sólo la naturaleza anatómica de las sustancias, sino también la existencia de las “semillas” de las enfermedades. Sin embargo, los organismos microscópicos (microorganismos) no fueron observados hasta que Antonio Van Leeuwenhoek (1632-1723) construyó microscopio con suficiente capacidad de aumento para hacerlos visibles.

Estructura y funcionamiento del microscopio compuesto

El microscopio compuesto consta de dos tipos de componentes: ópticos y mecánicos, que a su vez forma tres sistemas: mecánico, para sostener los sistemas anteriores y permitir el movimiento de las partes del microscopio; óptico, para aumentar el tamaño de la imagen del objeto observado, y de iluminación, para visualizar adecuadamente.

Sistema mecánico

La parte mecánica del microscopio consiste en un soporte metálico que sostiene el sistema óptico y el de iluminación; está provisto de un mecanismo que permite el desplazamiento de ambos sistemas a lo largo del eje del microscopio. El sistema mecánico incluye las partes siguientes: pie, platina, tubo, controles de enfoque (tornillos macro y micrométrico), portaobjetos o revólver, porta condensador y porta filtro.

Sistema óptico

El sistema óptico, que proporciona imágenes amplificadas, consta de tres juegos de lentes: objetivo, ocular y condensador.

Objetivo

Produce la imagen primaria y es responsable de su claridad. Los objetivos se clasifican de acuerdo con diferentes criterios: distancia focal, medio de trabajo y grado de corrección de las aberraciones cromática y esférica. Es importante conocer todas las indicaciones grabadas en un objetivo (figura 1).

El factor de aumento siempre aparece escrito en el objetivo. Los factores más frecuentes son: 1x, 1.25x, 2.5x, 3.2x, 4x y 5x (objetivos llamados lupas); 6.3x, 10x, 16x, 25x, 32x, 40x, 63x, 80x y 100x (objetivos de mayor capacidad de aumento).

La apertura numérica es un índice o factor que permite calcular el poder de resolución del sistema óptico. La apertura numérica del objetivo de 10x es igual a 0.22, la del objetivo de 40x es de 0.63 o 0.65, la del objetivo de 100x es de 0.9, 1.0, 1.2, 1.3 o 1.4. La apertura numérica también permite calcular la capacidad mínima y máxima de aumento del objetivo, multiplicando su valor por 500 y por 1,000 respectivamente.

En el objetivo se encuentra señalado su medio de inmersión; si no contiene una indicación específica, ello significa que su medio de inmersión en agua, glicerina y otros medios.

Ocular

Es una lente que permite aumentar el tamaño de la imagen primaria. El grado de amplificación total del microscopio se determina multiplicando el factor de aumento del objetivo por el factor de aumento del ocular.

Condensador

Conduce los rayos de la fuente luminosa a la preparación. En la parte inferior del condensador se encuentra un diafragma iris, que controla la cantidad de luz que pasa por él. Cuando se usan los objetivos seco débil y seco fuerte, el diafragma iris debe colocarse parcialmente abierto para reducir la cantidad de luz que se proyecta sobre la muestra. Cuando se emplea el objetivo de inmersión debe utilizarse una mayor abertura del diafragma iris para permitir la entrada de mayor cantidad de luz.

Sistema de iluminación

El sistema de iluminación consta de una fuente luminosa y un condensador de la lámpara. La iluminación puede ser suministrada por una fuente de luz artificial. Los rayos de luz son emitidos por una lámpara colocada en la base del microscopio. Otra fuente de iluminación es la luz solar, pero su utilización es poco práctica.

[pic 1]

Figura 1. Estructura del objetivo de inmersión de un microscopio compuesto.

Amplificación de la imagen

La amplificación de la imagen de un microscopio compuesto se obtiene mediante dos tipos de lentes; el objetivo, que produce la primera amplificación (imagen real), y el ocular, que produce una segunda amplificación, la cual genera una segunda imagen (virtual) que es captada por el ojo.

La mayoría de los microscopios compuestos poseen tres objetivos: seco débil (10x), seco fuerte (40x) y de inmersión (100x). La amplificación total del microscopio resulta de multiplicar el factor de aumento del objetivo utilizado por el factor de aumento del ocular. Los factores de aumento más comunes de los oculares son 6.3x, 8x, 10x, 16x y 25x.

[pic 2]

Objetivo seco débil [10x] [ocular 10x = 100 diámetros de aumento

Objetivo seco fuerte [40x] [ocular 10x] = 400 diámetros de aumento

Objetivo de inmersión [100x] [ocular 10x] = 1,000 diámetros de aumento

Poder de resolución de la lente

El poder de resolución de una lente es su capacidad de presentar por separado dos puntos adyacentes cercanos. Esta propiedad está en función de la longitud de onda de la luz empleada y la apertura numérica de la lente. En otras palabras, el poder de resolución es igual al diámetro de la estructura visible más pequeña.

El condensador situado debajo de la platina proporciona rayos paralelos y oblicuos, con lo que mejora la resolución del microscopio compuesto.

Preparaciones en fresco

Las preparaciones de muestra en fresco permiten observar los microorganismos sin necesidad de teñirlos; se observan con vida y es posible apreciar el movimiento de los que poseen mecanismos de locomoción. La ausencia de colorantes permite apreciar a los microorganismos como estructuras transparentes, como un contorno celular definido.

Materiales

• Microscopio compuesto.

• Portaobjetos.

• Cubre objetos.

• Pipetas Pasteur con bulbo.

• Muestra que se va observar: agua estancada.

Método

Preparación en fresco y observación al microscopio

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