Biometria Hematica

BIOMETRIA HEMATICA

1.- DETERMINACION DE HEMOGLOBINA (Hb)

Es una proteína conjugada de color rojo integrantes de los eritrocitos entre un 31-34%. Existen varios métodos para determinación como hematina ácida, hematina alcalina, oxihemoglobina, carboxihemoglobina y cianometahemoglobina; éste último es el de elección por que es estable en soluciones diluidas, porque existen en el mercado estándares de cianometahemoglobina y porque las lecturas se pueden hacer en espectrofotómetro de uso común y corriente.

La sangre se hemoliza por agregado de un agente densoactivo, con el ferrocianuro de potasio se oxidan el átomo de fierro de ferroso a férrico para producir metahemoglobina. El cianuro de potasio estabiliza la metahemoglobina pasando de cianometahemoglobina. La cloración producida es directamente proporcional a la concentración de hemoglobina presente.

Material:

o Tubos de ensayo de 13 x 100 ml

o Pipetas de 1ml

o Pipetas de Salí

o Boquillas

o Gradillas

o Gasa

o Celdas para espectrofotómetro

o Sangre capilar o venosa con anticoagulante.

Reactivos:

o EDTA al 10 % (.07 ml por .5 ml de sangre)

o Reactivo DE Drabkin:

o Ferrocianuro de potasio

o Cianuro de potasio

o Bicarbonato de potasio

o Solución estándar de cianometahemoglobina.

Procedimiento:

1.- En un tubo de ensayo, colocar 5 ml de reactivo de Drabkin

2.- Homogeneizar bien la sangre

3.- Llenar en sangre hasta la marca de la pipeta de Salhi

4.- Introducir la pipeta con sangre al tubo de ensayo y dejar caer la sangre, después mezclar bien la muestra.

5.- Se deja Reposar 10 min. Para la formación de cianometahemoglobina

6.- Calibrar primero el manómetro y después leer a 540 nanómetros en el espectrofotómetro contra un blanco de reactivo.

7.- comparar con la curva calibrada de estándares.

Valores de referencia:

Mujeres: 12 -14 gr/dl

Mujeres embarazadas: 11-14 gr/dl

Hombres: 13-19gr/dl

Recién nacidos: 13.19gr/dl

2.- DETERMINACIÓN DEL HEMATOCRITO

Sencillo y exacto, y es importante determinar los indices eritrocitarios.

El hematocrito mide el porcentaje del volumen de sangre total pero, ocupada solamente por los eritrocitos

Material:

o Tubo de Wintrobe que tiene 11.5 cm de largo x 3 mm de luz (hueco). Para el micro se usa el tubo capilar)

o Pipeta Pasteur larga o Cánula

o Centrífuga

o Sangre capilar (micro) o venosa (macro) con anticoagulante

Procedimiento:

o Después de extraer la muestra de sangre se coloca en el tubo de ensayo con el anticoagulante.

o Homogenizar perfectamente la sangre haciendo girar el tubo.

o Utilizando la pipeta Pasteur o canula para llenar de sangre el tubo de Wintrobe exactamente hasta 10, no deben quedar burbujas de aire en el tubo

o Centrífuga a 3600 rpm. Durante 30 min.

o Ver resultado.

Valores de referencia:

H= 47 +- 2.5

M= 42+- 2.5

3.- CUENTA ERITROCITARIA

Consiste en diluir la sangre con el líquido de Hayem en una proporción exacta y luego examinar al microscopio una pequeña cantidad de la muestra colocada en la cámara de Neubauer, contando el número de elementos que se encuentran en el retículo de la cámara y mediante una operación matemática se obtiene la cifra total.

Material:

o Tubos de ensayo de 13x100mm

o Pipetas de Thomas para glóbulos rojos

o Cámara de Neubauer

o Boquillas

o Microscopio

o Gasa

o Gradilla

o Sangre capilar o venosa con anticoagulante

Reactivos:

o EDTA (sal di sódica) al 10%

o Líquido de Hayem:

o Cloruro de mercurio 0.5 g

o Cloruro de sodio 1.0g

o Sulfato de sodio 5.0g

o Agua destilada 100ml

Procedimiento:

o llenar con sangre bien mezclada la pipeta de Thoma, hasta la marca 0.5. (Las pipetas están constituidas por dos porciones capilares y un bulbo central. El tubo capilar inferior está dividido en 10 partes iguales con marcos de0.5 y 1.0.En el interior del bulbo existe una perlita de plástico (roja), para favorecer la mezcla de la sangre con el líquido y en el capilar superior hay una marca 101)

o Se limpia cuidadosamente con gasa la parte externa de la pipeta para no contaminar el liquido de harem

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