Bioquimica

ANÁLISIS BIOQUÍMICO PARA EL RECONOCIMIENTO DE CEPAS BACTERIANAS

Sergio Luis Ortega Pardo1; Osvaldo Escorcia2

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1. Universidad del Magdalena, Facultad de Ciencias Básicas, Programa Biología, Santa Marta Magdalena, Colombia; E-Mail: Mrs9318@Hotmail.Com

2. Universidad del Magdalena, Facultad de Ciencias Básicas, Programa Biología, Santa Marta, Magdalena, Colombia; E-Mail: Oswaldoes_@Hotmail.Com

Resumen:

En el presente laboratorio se realizaron pruebas bioquímicas a una cepa de bacterias en las cuales se pudo determinar la presencia o ausencia de algunas enzimas en las cepas, enzimas como la catalasa, oxidasa, azucares como la fructosa sacarosa, lactosa, glucosa, entre otras con el fin de poder establecer la taxonomía, morfología y fisiología de las mismas. Pudiendo en base a estos resultados reconocer géneros bacterianos con ayuda de la guía brindada por el docente

Palabras Claves: catalasa, oxidasa, citrato, idol, voges proskauer, bioquímica

Introducción:

Los microorganismos no tienes la capasidad de generar o crear material organicoapartir de elemento o sustancias inorganica, por esto se nutren del medio en el que se encuentren en el interior de los microarganismos ocurren una serie de reacciones de sintesis y desconcicion de sustancias, recibe el nombre de metabolismo, dependiendo del metabolismo que presente la cepa se realizaran pruebas obteniendo la identificacion. la realizacion de estas pruebas bioquimicas la cual nos permite responder a la inquietud de poder identificar con exito la cepa bacteriana.

Materiales:

• Caja petri con cultivo bacteriano puro

• Asa bacteriológicas rectas y redondas

• Palillos estériles

• Peróxido de hidrogeno

• Tira de oxidasa

• Tubos inclinados de agar TSI

• Reactivo naftol

• Reactivo de KOH 40%

• Encendedor

• Tubo con caldo rojo de fenol mas xilosa, manosa, galactosa, con campana Durham

• Tubos inclinados de agar citrato de Simmons

• Tubo de agar SIM

• Tubo con caldo urea

• Tubo con caldo RM-VP

• Reactivo de Kovacs

• Machero

• Cinta de enmascarar

Procedimiento:

Prueba de Catalasa: Para esta prueba se agrega una gota de H2O2, luego en la misma con ayuda de un palillo depositar una minúscula cantidad de cultivo bacteriano. Si hay formación de burbujas (aunque sea muy pocas) la reacción será positiva.

Prueba de de Oxidasa: se toma con ayuda de un palillo una cantidad pequeña de cultivo bacteriano y se frota en una tira de papel de oxidasa. Si en el papel aparece una coloración rosa o violeta oscuro es una reacción positiva.

Prueba de Fermentación de azucares: Esta busca determinar si hay fermentación u oxidación de los azucares como la lactosa, sacarosa, glucosa y si existe la presencia de sulfuros. Para esto se utiliza agar T.S.I el cual se inocula con la bacteria utilizando el asa recta.

El agar T.S.I es oblicuo y es de coloración naranja en su totalidad. Se siembra picando con el asa hasta el fondo y al momento de retirar en estrías. Sembrar con ayuda de asa recta una muestra de colonia bacteriana en tubos de caldo fenol. Estos se incuban a 37°C durante 24 horas.

Prueba del Citrato: en esta prueba se inoculo el agar de Simmons Citrato inclinado con la bacteria el cual se incuba a 37°C por 24 horas

Prueba de Indol: esta prueba permite estudiar el metabolismo proteico, especialmente de la degradación del Triptófano por parte de los microorganismos. La capacidad de formar idol y productos indolicos a partir del Triptófano (Granados R., y Villaverde C., 2002).

Con base en esta se puede determinar la formación de sulfuros, la producción de idol y la movilidad de la bacteria.

Para ello se inocula un tubo de ensayo con agar SIM, luego se incuba a 37°C por 24 horas. Para poder determinar los resultados se le agregan 10 gotas del reactivo Kovacs, si se forma un anillo de color rojo cereza

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