CINÉTICA DE DEGRADACIÓN DE VITAMINA C POR EFECTO DE TEMPERATURA

CINÉTICA DE DEGRADACIÓN DE VITAMINA C POR EFECTO DE TEMPERATURA

(ESPECTROFOTOMETRÍA)

OBJETIVOS

- Elaborar la curva de calibrado de vitamina C

- Evaluar el efecto de la temperatura con la presencia de vitamina C.

MARCO TEORICO

 Vitamina “c”

Cada determinación de análisis cuantitativo por espectrofotometría debe realizarse en una longitud de onda específica a fin de que los datos a obtenerse sean precisos y exactos.

La determinación del contenido de ácido ascórbico en frutas y vegetales puede realizarse por diversos métodos. Siendo uno de ellos el espectrofotométrico propuesto por el Dpto. de Agricultura de Canadá. Se basa en la reducción del colorante 2 – 6 Diclorofenol por efecto de la solución estándar de colorante; esta capacidad es determinada espectrofotométricamente.

El valor del reactivo 2 – 6 DFIF se ve limitado por la presencia de sustancias reductoras como sales ferrosas, sulfitos, compuestos sulfihidricos entre otros. Estas sustancias podrias estar presentes en ciertos productos que hayan sufrido un prolongado tratamiento térmico o almacenamiento.

MATERIALES Y EQUIPOS

Espectrofotómetro Spectromon 401

 Cubetas del Espectrofotómetro

 Filtros del Espectrofotometro 480, 520 y 540 nm.

 Papel Tissue

 Pipetas 1, 2, 3, 4, 5 y 10 ml

 Fiolas de 100 y 1000 ml.

 Tubos de Prueba.

Reactivos a usar.

- Acido oxálico

- Acido ascórbico

- 2 – 6 DFIF

PROCEDIMIENTO

1. Reactivos

a) Preparar una solución de ácido oxálico al 0.4 % pesar 4 gr. De este ácido y llevar a volumen de 1000 ml. Con agua destilada.

b) Soluciones estándar (madre) de ácido ascórbico: Preparar una solución de 0.1 % de ácido ascórbico en una solución ácida de 0.4 % de ácido oxálico. Pesar 100 mg. de ácido ascórbico y llevar a volumen de 100 ml. con una solución de ácido Oxálico al 0.4 %.

c) Estándares de trabajo (ET): Tomar 1, 2, 3, 4 y 5 ml. de la solución madre de ácido ascórbico y llevar a volumen de 100 ml. con una solución de ácido oxálico al 0.4 %. Esta solución numeradas del 1 al 5 contendrán 1, 2, 3, 4 y 5 mg. de ácido ascórbico por 100 ml. respectivamente.

d) Solución coloreada (Colorantes): pesar 12 mg. de 2 – 6 DFIF, disolver y llevar a 1000 ml. de volumen con agua destilada. Utilizar agua destilada hirviente. Almacenar en botella de color oscura y en refrigeración.

2. Preparación de la Curva Estándar.

a) Tomar 4 tubos de prueba y enumerarlas de I al IV y agregar lo siguiente:

I 10 ml. de agua destilada

II 1 ml. de ácido oxálico al 0.4%

III 1 ml. de estándar de trabajo (ET) Nº 1 + 9 ml. de agua

IV 1 ml. del estándar de trabajo (ET) Nº 1

b) Ajustar a cero la Absorbancia usando I y el filtro seleccionado.

c) Al tubo II añadir 9 ml. del colorante y exactamente después de 15 segundos, leer la absorbancia.(L1)

d) Ajustar a cero la absorbancia con la solución del tubo III

e) Al tubo IV añadir 9 ml. del colorante y exactamente después de

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