CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS EN CULTIVOS BATCH

CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS EN CULTIVOS BATCH

BACTERIAL GROWTH BATCH CROP

Departamento de Química, Universidad de América, Cundinamarca, Bogotá.

Resumen: para la práctica de laboratorio se desea estudiar el crecimiento microbiano de un cultivo de levadura en una fermentación batch y de esta forma poder determinar las fases de crecimiento. Durante la práctica se realizó el inoculo con levadura en el medio de cultivo, el cual se dejó por varios días en crecimiento, para luego poder determinar la absorbancia al cultivo por medio del espectrofotómetro, obteniendo como resultado a 620nm una absorbancia menor a 400 y en otros casos teniendo que diluir para que el valor fuera menor a este  y de esta forma poder obtener la curva de crecimiento de un microorganismo, esperándose como resultado la obtención de una gráfica como la mostrada en la figura 1.  

Palabras claves: fermentación batch, inoculo, absorbancia, curva de crecimiento, espectrofotómetro

Abstract: for lab study desired microbial growth of a yeast culture in a batch fermentation and thus to determine the growth phases. In practice the inoculum is performed with yeast in the culture medium, which was left for several days in growth, and then to determine the absorbance crop through the spectrophotometer, resulting to 620nm less than 400 and absorbance other cases having to dilute to the outside less than this value and thus to obtain the growth curve of a microorganism and is expected as a result obtaining a graph as shown in figure 1.

Key words: batch fermentation, inoculum, absorbance, growth curve, spectrophotometer

Introducción:

El crecimiento microbiano es el aumento del número de microorganismos a lo largo del tiempo, para obtener un óptimo crecimiento es necesario tener en cuenta un adecuado aporte de nutrientes. Para el crecimiento de microorganismos es importante tener en cuenta el medio de cultivo, un medio de cultivo es un conjunto de componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos.

Para el desarrollo de la práctica se desarrolló 100ml de medio de cultivo con glucosa con la siguiente composición: peptona 20g/l, extracto de levadura 10g/l y glucosa 20g/l, con esta composición se satisface un óptimo crecimiento de los microorganismos ya que se encuentra los nutrientes necesarios; el medio de cultivo es mezclado con el inoculo, de esta forma empieza a crecer las levaduras en el shaker, debido a las condiciones en las que se dejó.

Para determinar que hubo un crecimiento en el medio de cultivo se realiza una toma de muestras y es llevado al espectrofotómetro para determinar la absorbancia en una longitud de 620nm, se realizó la medida de la absorbancia 8 veces, esto para poder determinar la curva de crecimiento de los microorganismos y la concentración de células.  

La curva de crecimiento es la representación gráfica del logaritmo de células frente al tiempo. Hablando en caso teórico la representación sería una línea recta dado que siempre estarían creciendo los microorganismos, pero en la práctica se evidencia que no es así  y se evidencia en la figura 1 que nos muestra las diferentes fases del microorganismo          

[pic 1]

 Figura 1.- Curva de crecimiento de un microorganismo

Para determinar la concentración de células se aplica la siguiente ecuación:

x (g/l) =(7.01*Ab +0.026)*D

Materiales y métodos

Para la práctica se utilizó los siguientes reactivos para la producción del medio de cultivo:

1. Peptona
2. Glucosa
3. Extracto de levadura

Se utilizaron los siguientes materiales y equipos durante el desarrollo de la práctica:

1. Espectrofotómetro
2. Agitador magnético
3. Matraz de 500ml
4. Tubos de ensayo

El laboratorio se realizó en dos partes:

1. CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS:

1. Preparación del medio de cultivo: contener 100 ml de medio de cultivo con la composición ya descrita anteriormente. Dejar esterilizando mediante autoclave
2. Preparación del inoculo: Los inóculos a utilizar están contenidos en tubos de ensayo. En cada tubo hay 4 ml del medio de cultivo (antes descrito), el cual cada grupo deberá inocular con levadura, y dejar incubando durante la noche a 30°C en un agitador magnético (shaker) a 180 rpm

1. TOMA DE MUESTRAS:

1. Para seguir el crecimiento del cultivo se deben tomar muestras del               cultivo cada determinado intervalo de tiempo (1 hora), y luego medir su absorbancia en el espectrofotómetro

Resultados

La toma de absorbancia se realizó 8 veces, el valor dado por el espectrofotómetro se encuentra en la tabla 1.  

Tabla 1. Tabla de datos

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