Cromatografía

CROMATOGRAFÍA

La cromatografía en capa fina es una capa de un solido que esta sobre una superficie plana.

Componentes del sistema cromatografico y la naturaleza de cada uno de ellos: EN LA PRACTICA DE AMINOACIDOS.

- La muestra: que esta en un disolvente adecuado (en este caso los patrones de los aminoácidos estaban preparados de una solución al 10% de n-propanol )

- La fase estacionaria: gel de sílice

- La fase móvil:

-fase A: n-butanol, acido acético, agua.

- faseB: n-butanol, metanol, amoniaco 30%

- La fase de vapor: cuando se trabaja en cromatografía plana se forma esta fase. Esta se forma cuando se utilizan SOLVENTES ORGANICOS ejemplo alcohol estos tienen punto de ebullición bajo y se van a volatilizar, entonces esta fase tiene que estar en equilibrio con la fase estacionaria y la fase móvil (se coloca papel aluminio).

Hoy en día la cromatografía en capa fina se utiliza con fines cuali-cuantitativos, es decir, separa y determina en forma cualitativa (para identificar) y cuantitativa (la cantidad de cada uno de LOS COMPONENTES QUE HAN SIDO SEPARADOS, hay unos que no se separan como ocurrió en la practica estos no se determinan, el desarrollo cromatografico es para los que se separaron) mezclas complejas a nivel de trazas...

Actualmente también se le conoce como CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA DE ALTA RESOLUCION o HTPLC

Ventajas de la cromatografía en capa fina frente a la cromatografía en papel

1. Hay mayor poder de resolución

2. Se logra una buena separación

3. Los desarrollos en general son mas rápidos en c. en capa fina que en c. en papel, esto se debe al tamaño de las partículas (la capa del solido son micro partículas que tienen intersticios y entre las partículas tienen poros, entonces esto permite que la fase móvil suba rápidamente por capilaridad)

4. Las manchas son mas compactas obteniéndose separaciones muy nítidas

Método químico de revelado (se identifican los solutos dentro de la capa fina): reactivo de ninhidrina, es un agente químico que actúa con los aminoácidos y produce un color. Se utiliza un método de revelado cuando los componentes de la muestra se han separado y las manchas son incoloras.

El acido sulfúrico cuando se trabaja con solutos orgánicos estos reaccionan y producen colores que están entre el marrón y el negro. El ac. Sulfúrico (agente químico de revelado) carboniza a solutos orgánicos lo podemos utilizar cuando se esta trabajando en capa fina pero no en papel porque el papel tiene polímeros orgánicos entonces se carbonizarían las manchas y el papel.

5. En capa fina para la localización de las sustancias separadas que son incoloras se utilizan diferentes métodos tanto físicos como químicos.

6. Otro método químico de revelado es el yodo solido(a temperatura ambiente sublima (pasa de estado solido a gaseoso)) este está dentro de una cámara de desarrollo. Las manchas se colorean marrón en forma momentánea pero al pasar el tiempo estas manchas desaparecen y se deben marcar alrededor con un lápiz.

7. Otra ventaja es que se pueden usar con fines preparativos (cuando se trabaja con fines preparativos se quiere separar una gran cantidad de un componente,

Ejemplo se tienen una muestra, en esta hay diferentes solutos estos se deben separar cada uno en la capa fina (capa del solido), tenemos un a.a A, un a.a.B y a.a. C y me interesa el C entonces los separo en la placa de capa fina quiero mucha cantidad de este a.a entonces no trabajo con fines analíticos sino con fines preparativos y para esto el espesor de la capa del solido tiene que ser mayor.

En la práctica de a.a la capa es de 0.1- 0.2 mm (espesor para fines analíticos cualitativos y cuantitativos).

En cambio cuando se quiere recoger una cierta cantidad de analito que me interesa, La capa es mayor, se trabaja con placas de espesor de 0.5- 2 mm. El espesor lo que me permite es sembrar mayor cantidad de muestra.

Si se siembra mucha cantidad de muestra en una q es de 0.1-0.2mm NO se separa bien porque se esta saturando la capacidad el solido de la placa.

8. la aplicación de cromatografía en capa fina con la de papel es que nos permite separar solutos de diferente naturaleza. Solutos polares, No polares, orgánicos e inorgánicos.

La de papel generalmente permite separar solutos que son solubles en agua por decirlo así… solutos solubles en solventes polares… hidrofilicos.

9. Es una técnica más rápida, más eficaz y más versátil (versátil porque permite hacer más tipos de separación; relacionado con el campo de aplicación, productos orgánicos inorgánicos, polares y no polares).

RECORDAR:

La naturaleza del solido: el solido se le llama que es ACTIVO cuando se trabaja en cromatografía de adsorción, cambio iónico y exclusión, es decir el es directamente la fase estacionaria.

Y el solido solo es un SOPORTE cuando se trabaja con cromatografía de reparto (fase estacionaria es liquida).

Para la selección de la fase estacionaria se debe tomar en cuenta principalmente la naturaleza de los solutos a separar, saber cuales son las propiedades físicas o fisicoquímicas de los analitos (si es un intercambiador, si tiene características de adsorbentes, si es soluble en la fase estacionaria o en la fase móvil, etc). En el procedimiento siempre lo primero que debe hacerse es seleccionar la fase estacionaria, luego se selecciona la fase móvil.

Tipos de fase estacionaria o tipos de solventes

(OJO no se si es solvente pero ella dijo q este se encuentra con otro nombre)

- El gel de sílice mas utilizado

- La celulosa (en forma de partículas),

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