Cuaderno Inmunología

Laboratorio 2ºB

Contenido

Práctica 1. Grupo sanguíneo celular        3

Práctica 2. Rosa bengala        6

Práctica 3. RPR carbón        8

Práctica 4. Preparación de suspensión de hematíes        10

Práctica 5. Pruebas de antiglobina indirecta y directa        12

Práctica 6. TPHA Hemaglutinación        14

Práctica 7. Determinación de IgA por inmunodifusión radial        16

Práctica 8. Detección rápida de anticuerpos tetánicos en muestra.        18

Práctica 9. Test inmunocromatográfico para la detección de Estreptococos        20

Práctica 10. MI Látex        22

Práctica 11. Calibración IgA        24

Práctica 1. Grupo sanguíneo celular

-Objetivo; detectar el grupo sanguíneo celular.

Para detectar el celular se puede realizar en porta o en tubo.  En ambos casos los hematíes problema que contiene sustancias antigénicas del sistema ABO y RH se enfrentan con antisueros que contienen anticuerpos dirigidos contra esos antígenos.

El resultado final consiste en la aglutinación de los eritrocitos cuando reaccionan con el antisuero complementario.

-Fundamento; consiste en observar la aglutinación de los hematíes enfrentados a una serie de antisueros para determinar el grupo ABO y RH del individuo.

-Materiales; Portaobjetos

• Rotulador
• Pipeta Pasteur desechable
• Palillos mezcladores
• Reactivos: Suero Anti A, suero AntiB y suero AntiD
• Lámpara visualizadora

[pic 1]         

-Muestra; en nuestra primera técnica usaremos sangre total anticoagulada y en la segunda usaremos nuestra propia sangre capilar sacada al puncionar con una lanceta.

-Técnica; Cogemos una tarjeta la cual viene ya preparada con círculos los cuales están diferenciados.

• Echaremos una gota en cada uno de los tres círculos con la pipeta Pasteur del tubo o del propio dedo tras puncionar con la lanceta.
• Depositamos una gota de suero AntiA en la sección A de la tarjeta.
• Depositamos una gota de suero AntiB en la sección B de la tarjeta.
• Depositamos dos gotas de suero AntiC en la sección C de la tarjeta.
• Mezclar ambas gotas utilizando un palillo distinto para no contaminar.
• Hacer oscilar el porta de delante hacia atrás durante dos minutos.
• Observar presencia o ausencia de aglutinación.

En el caso del RH el portaobjetos se puede observar con un visualizador calentando a 37º balanceando para ver resultados durante dos minutos.

-Resultados; -hay aglutinación cuando aparecen grumos rojos que flotan en un líquido claro. ----En caso contrario los hematíes permanecerán en forma de suspensión homogénea de color rojizo.

-La presencia o ausencia de aglutinación puede confirmarse el microscopio.

1. En esta primera imagen, se puede observar la técnica en la que nos sacamos sangre periférica ayudándonos de una lanceta.

En la primera línea, podemos observar los tres círculos que aparecen coloreados, en los cuales se distingue que sólo en el último de los tres está precipitado, el cual coincide con que es el antisuero AntiD, que precipita al tener Rh positivo. Los otros dos, el primero y segundo no ha precipitado porque el grupo sanguíneo es 0+, por tanto no tendría nada que aglutinar al no haber antígenos A, ni B.

[pic 2]

1. En esta segunda imagen, la cual es correspondiente a sangre total, casualmente, coincide con la primera línea de la anterior tarjeta, en la que podemos ver que sólo aglutina en el tercer círculo, correspondiente al Rh, y que por tanto, al aglutinar, es positivo. Otro 0+, porque sólo aglutina en el Rh. El de debajo es 0-, porque tan siquiera aglutina el Rh.

[pic 3]

Para detectar el grupo sanguíneo a partir de una suspensión de hematíes:

-Materiales; Tubo de hemólisis

• Pipetas Pasteur
• Papel filtro
• Centrífuga
• Visualizador

-Reactivos; AntiA, AntiB y AntiD

-Muestra; suspensión de hematíes al 4% aproximadamente.

-Técnica; Rotulamos 3 tubos de hemólisis con las letras: A, B y D. Añadimos en cada tubo 2 gotas de suspensión de hematíes y una gota de reactivo correspondiente al tubo (al tubo; AntiA. Al tubo B; AntiB. Al tubo D; AntiD.).

• Centrifugamos un minuto a 1000rpm o 30 segundos a 3000rpm.
• Cuando termine la centrífuga, sacaremos el tubo y daremos un pequeño golpe al tubo para resuspender las células y observamos si hay o no aglutinación; observando si hay botón o velo.

[pic 4]

-Resultado; Podemos observar que aglutina nada más que en el tubo A el cual contenía AntiA.

Podemos confirmar que la persona es A negativa.

Práctica 2. Rosa bengala

-Objetivo; Determinar cualitativamente anticuerpos anti- Brucela.

-Fundamento; El rosa de bengala es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de anticuerpos anti- Brucela en suero humano o animal. La suspensión bacteriana y coloreada, es aglutinada por anticuerpos IgG o IgM presentes en el suero del paciente.

-Materiales; Papel filtro

• Micropipeta
• Puntas para micropipeta
• Palillos o agitador
• Tarjeta o portaobjetos
• Gradilla
• Eppendorf

-Reactivo; Rosa Bengala; suspensión de Brucela en tampón lactato.

• Control positivo; suero animal con contenido de anticuerpos anti-Brucela.
• Control negativo; suero animal sin anticuerpos anti- Brucela.

-Muestra; Suero o plasma (debe ser centrifugado para apartar la fibrina).

-Técnica; Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.

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