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Determinacion de proteinas por el método de Lowry


Enviado por   •  12 de Abril de 2016  •  Ensayo  •  1.074 Palabras (5 Páginas)  •  1.086 Visitas

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Instituto Politécnico Nacional[pic 1][pic 2]

Escuela nacional de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Métodos de Análisis

Determinación de proteínas por el método de Lowry

Profesor: Francisco Fernández López

Alumna:

Chato morris gutierrez

Grupo: 4IM1               Semestre: 15/2        Sección: 3

[pic 3]

OBJETIVOS:

  1. Elaborar una curva de calibración para la cuantificación de proteínas empleando un método fotométrico.
  2. Determinar si hay diferencia estadísticamente significativa en la precisión y exactitud entre los métodos de Bradford y Lowry.
  3. Conocer el efecto de sustancias no proteicas, en el desarrollo de color.
  4. Analizar las ventajas y desventajas del método de Lowry, con respecto a otros métodos para la cuantificación de proteínas.  

FUNDAMENTO:

El método de Lowry utiliza tres sistemas para producir coloración por la presencia de proteínas. En primer lugar, el Cu+, forma complejos de coordinación con dos enlaces peptidicos consecutivos de las proteínas, dando lugar a un compuesto coloreado azul.  En segundo lugar, este compuesto es capaz de reducir el reactivo de Folin-Ciocalteu (ácido fosfotungstico y fosfomolibdico), dando un color mas azulado. Por último, el reactivo de Folin-Ciocalteu también reacciona con los restos tirosinil (residuos de tirosina) de la cadena polipeptidica, produciendo así mismo un color azul por la reducción de fosfomolibdato en  medio básico.

RESULTADOS:

Tabla 1. Curva de calibración de albúmina

Tubo

No.

Cantidad de proteína

(μg)

A595

Serie a

Serie b

1

25

0.023

0.029

2

50

0.080

0.043

3

75

0.119

0.110

4

100

0.142

0.130

5

125

0.186

0.188

Tabla 2. Resultados de la regresión lineal

Aplicando la regresión lineal a la curva graficada

R

0.9815

A

0.001586

B

-0.0139

[pic 4]                             Grafica 1. Representación de la curva de calibración.

De la ecuación de la curva y=0.001586x - 0.0139 donde y es la absorbancia y x la concentración de proteína, despejando a x obtenemos; x= .[pic 5]

Tabla 3. Replicas para el análisis estadístico obtenidas con la ecuación de la curva.

Tubo No.

A595

Cantidad de proteína

(x); (μg)

1

0.132

92.0239

2

0.110

78.1525

3

0.124

86.9798

4

0.121

85.0882

5

0.107

76.2610

6

0.104

74.3648

7

0.108

76.8915

8

0.108

76.8915

9

0.108

76.8915

10

0.109

77.5215

Tabla 4. Resultados del análisis estadístico realizado con las concentraciones obtenidas.

S

S2

%C.V.

μ

80.1070

5.8051

33.6991

7.2466

75.95-84.25

   

 μ = X͞    ±             t: “t” tablas (2.262)[pic 6]

     μ = 80.10   ±        μ = 80.10  ± 4.12   [pic 7]

  %C.V. =  x 100         %C.V. =  x 100 = 7.24 %[pic 8][pic 9]

Tabla 5. Efecto de algunas sustancias no proteicas que interfieren en el método de Bradford.

Tubo No.

sustancia

A595

Cantidad de proteína

Tipo de interferencia generada

1

Tris 1M, pH 7.0

0.156

107.15

Positiva

2

Glicerol al 1% (v/v)

0.147

101.48

Positiva

3

Detergente comercial al 1%

0.161

110.30

Positiva

4

Dodecil sulfato de sodio al 1%

0.134

93.28

Positiva

5

Ácido tricloroacético al 5%

0.129

90.13

Positiva

Tabla 6. Comparación del método de Lowry con otros métodos de determinación de proteína (ventajas y desventajas)

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