Digestión de Carbohidratos Complejos por Amilasa Pancreática

Practica 5. Digestión de Carbohidratos Complejos por Amilasa Pancreática[pic 1]

José Natividad Rocha García 135367, Judith Elisa Chávez Zubia 101027, Alva Marina Cano Porras 121217, Diana E. González Hinojosa, 97570.

Universidad Autónoma de ciudad Juárez - Instituto de Ciencias Biomédicas - Programa de licenciatura en Química- Laboratorio de Bioquímica de alimentos - Docente: Dra. Nina del Roció Martínez R.

Resumen

Introducción

El páncreas es una glándula mixta compuesta por tejido endocrino y exocrino, estos se agrupan formando lóbulos visibles, en humanos un 80-85% del páncreas está formado por tejido de naturaleza exocrina. El páncreas exocrino está formado por los ácinos y el sistema ductal. Cada unidad funcional básica está formada por células secretoras acinares.

Características del jugo pancreático.

El jugo pancreático es un líquido incoloro, con una densidad entre 1.007 y 1.035 dependiendo de la concentración de proteínas, tiene un pH alcalino, contiene dos tipos de secreción la enzimática y la hidroelectrolítica. La enzimática es la responsable de la hidrolisis de las sustancias nutritivas, mientras que la hidroelectrolítica actúa como vehículo de las enzimas y proporciona la alcalinidad necesaria para el funcionamiento enzimático, luego de neutralizar el quimo acido, esto se da mediante la secreción de bicarbonato de sodio. El volumen de secreción de jugo pancreático oscila entre 0,2-0,3 ml/min en condiciones basales y 5 ml/min cuando se estimula de forma adecuada; el volumen total diario oscila entre 1 y 4 L.

El páncreas es la glándula del cuerpo que secreta la mayor cantidad de enzimas por gramo de tejido, estas son de tipo proteolíticas, lipolíticas, glucoliticas y nuclolíticas. Estas enzimas digestivas son sintetizadas en el retículo endoplasmico rugoso, de ahí son transportadas al aparato de Golgi. Ahí se transforman experimentando sobretodo glicosilación. La mayoría de las enzimas pancreáticas son excretadas como zimógenos o proenzimas inactivas para evitar la auto digestión, estas son inhibidas por un péptido de tripsina, este es retirado luego por la enteropeptidasa de la mucosa duodenal.

En cuanto a las enzimas glucoliticas, la amilasa es una alfa (1-4) glucosidasa, que participa en la digestión de los di, tri, tetra y polisacáridos restantes, luego de la digestión mecánica y química de la boca, esta enzima los fracciona hidrolizando enlaces alfa (1-4) glucolíticos (Sastre, J. 2005).

El objetivo de la práctica es comprender la segunda fase de digestión química de carbohidratos, la especificidad enzimática y de sustrato.

Metodología.

A: Preparación de la enzima base (amilasa pancreática, 3mg/mL).

Se preparó una solución de 15mg de pancreatina en 5mL de agua destilada con un pH de7-8 y se homogenizó en un Vortex.

B1. Preparación de la solución de almidón (2% P/V).

Se disolvieron 2g de almidón en 100mL de agua destilada y se homogenizaron en el Vortex.

B2. Preparación de la solución de celobiosa (0.5% P/V).

Se disolvieron 500mg de celobiosa en 100ml de agua destilada. Se homogenizó la mescla en presencia de calor moderado, hasta que se disolvió por completo.

C. Digestión de almidón y celobiosa.

Se colocaron 2mL de la solución de almidón en un tubo de ensayo, se le agregaron 2mL de agua destilada y 1ml de la solución base de la enzima. En otro tubo se colocaron 2mL de la solución de almidón al 2% y 3mL de agua destilada. En otro tubo ensayo se colocaron 2ml de la solución de celobiosa al 0.5% en un tubo de ensayo, se le agregaron 2ml de agua destilada y 1ml de solución base de enzima. En un cuarto tubo se colocaron 2ml de solución de celobiosa y 3ml de agua destilada. Los cuatro tubos fueron homogenizados en un Vortex, luego se colocaron en baño maría a 37°C durante 45min. Transcurrido el tiempo se realizaron las siguientes pruebas.

C. Reacciones con lugol y reactivo Benedict.

Para la prueba de lugol se midió 1ml de da cada uno de los tubos que se prepararon en el apartado anterior y se añadieron 4 gotas a cada tubo, se mezclaron y se observó el cambio de color de la solución.

Para la prueba Benedict, se midió 1ml de cada tubo y se les agrego 1ml de reactivo Benedict, se mezclaron y se sometieron a baño a ebullición durante 5min. Se observaron para observar el cambio de color y formación de precipitado.

Resultados.

Discusión.

Conclusión.

La reacción o prueba de Benedict identifica azucares reductores, estos son aquellos que cuentan con el OH libre unido al carbono anomérico, algunos ejemplos son la lactosa, glucosa, maltosa, celobiosa entre otros. La reacción se da en un medio alcalino, donde el ion cúprico que es otorgado por el sulfato cúprico es capaz de reducirse por el efecto del grupo aldehído del azúcar a su forma Cu+. Este ion se observa como un precipitado rojo ladrillo el cual corresponde a oxido cuproso (Lozano, J. 2012). Y la reacción es la siguiente.

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El reactivo de Lugol es una disolución compuesta por yodo y yoduro potásico, es una prueba cualitativa que sirve para determinar si en una solución de azúcares no reductores existen polisacáridos, particularmente el almidón. Cuando el almidón se pone en contacto con unas gotas de lugol, toma un color azul violeta característico la amilosa se colorea de azul oscuro a negro y la amilo pectina se colorea entre naranja y amarillo (Sánchez, M. 2013) Y el complejo formado es el siguiente.

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