El virus de Rotavirus
Enviado por Josuapo • 1 de Junio de 2014 • Ensayo • 449 Palabras (2 Páginas) • 335 Visitas
El virus de Rotavirus es el agente causal de gastroenteritis aguda en diarreas infantiles más común durante la temporada de invierno, al trastorno también se le conoce como gastroenteritis infecciosa no bacteriana aguda y gastroenteritis viral aguda; el Rotavirus es el virus más común y más extenso del Grupo A.
El virus del Rotavirus posee un genoma de 11 segmentos de RNA de doble cadena. Las partículas tienen 70 nm de diámetro y una densidad de 1.36 g7ml, posee 6 grupos diferentes de los que el A, B y C infectan al hombre.
La microscopia electrónica fue el primer método para detectar Rotavirus, en la actualidad se utilizan electroforesis en gel, hibridación o amplificación genética. Estas técnicas necesitan una concentración del virus de 107-11 gramo por (1).
EXTRACCIÓN DE RNA FENOL-CLOROFORMO
El protocolo de extracción de RNA da la posibilidad de obtener partículas de RNA libre de contaminantes, proteínas y enzimas; se usa con normalidad en aquellas muestras en las que su genoma se desea separar y amplificar para su estudio (2).
ELECTROFORESIS EN GEL
La electroforesis en gel es un método de química analítica que te permite separar biomoleculas dependiendo de su carga y peso molecular, bajo un campo eléctrico. Fue descubierto por Tiselus en 1937, en el cual empleo como soporte un gel de poliacrilamida, que posteriormente fue mejorado por los investigadores Davies y Ornstein. En 1979 se emplearon agentes reductores como SDS en la determinación del peso molecular de proteínas, a esta se le denomino electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS (3).
TINCION CON NITRATO DE PLATA
La tinción con sales de plata, se basa en la reducción de la plata, y la impregnación del gel con sales metálicas (plata), para dar lugar a precipitados metálicos en las estructuras (4).
MATERIAL Y METODOS
1. Elaborar una suspensión de heces diamcicas al 20% se colocan en un tubo eppendorf de 1.5ml (200µl de suspensión más 800µl de PBS).
2. Mezclar por 2min en vortex.
3. Se centrífuga a 12,000 rpm en un periodo de 5 minutos.
4. Al sacarlo de la centrífuga se toman 200 L del sobrenadante y se le coloca en otro tubo eppendorf nuevo.
5. Al sobrenadante se le agrega 200 L de buffer lisis (β-mercaptoetanol).
6. Se homogeniza en el vortex por un tiempo de 2 minutos
7. Se agrega 200 L de fenol- cloroformo con Tris pH 8
8. Se homogeniza en el vortex por un tiempo de 2 minutos
9. Se agrega 200 L de cloroformo
10. Se homogeniza en el vortex por un tiempo de 2 minutos y se centrífuga a 14,000 rpm en un periodo de 5 minutos.
11. Al sacarlo de la centrífuga se aprecian dos fases y una interfase. De la fase superior
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