En el presente informe damos los resultados obtenidos en la práctica 1 (Determinación Enzimática)

RESUMEN

En el presente informe damos los resultados obtenidos en la práctica 1 (Determinación Enzimática) realizada el 22 de febrero del 2016 en la Fundación Universidad de América. Para iniciar, en esta práctica elaboramos dos soluciones de medio cultivo con dos concentraciones diferentes (10g/l y 15 g/l) de glucosa con el fin de determinar la producción de la biomasa a estas condiciones; medimos el pH para ratificar que este se encontraba por debajo de los 5 en la escala de acidez. Como ninguna de las dos soluciones cumplía esta condición agregamos ácido ascórbico en pequeñas cantidades evitando que no fuera alterado bruscamente y procedimos a esterificar la muestra, mientras la muestra esterificaba realizamos la inoculación; para ello en un porta objeto colocamos una pequeña cantidad de levadura humedad con una gota de agua y realizamos la prueba de Tinción de Gram; con la muestra de 10g/l y 15 g/l de glucosa ya esterificada, agregamos 0,376 g para 75 ml de solución y 1,1235 g/ml de levadura, respectivamente, medimos la absorbancia de la muestra, luego centrifugamos, nuevamente medimos la absorbancia y determinamos la cantidad de azúcar y biomasa presente en las muestras además de la producción de CO2.

PALABRAS CLAVES

• Biomasa
• Sustrato
• Glucosa
• Levadura
• Tinción de Gram
• Esterificación

ABSTRACT

In this report we give the results obtained in practice 1 (Determination Enzymatic) on 22 February 2016 at the University of America Foundation. To start, in practice we developed two solutions culture medium with two different concentrations (10 g / l and 15 g / l) glucose in order to determine biomass production to these conditions; pH measured to confirm that this was below 5 on a scale of acidity. Since neither of the two solutions meet this condition ascorbic acid added in small amounts to avoid that was not altered abruptly and proceeded to esterify the sample while the sample esterificaba perform inoculation; for it on a glass slide we placed a small amount of yeast moisture with a drop of water and perform a Gram stain test; with the sample of 10g / l and 15 g / l glucose and esterified added 0.376 g to 75 ml of solution and 1.1235 g / ml yeast, respectively, measure the absorbance of the sample, then we centrifuged again measured the absorbance and determine the amount of sugar and biomass present in the samples in addition to the production of CO2.

KEYWORDS

• Biomass

• Substrate

• Glucose

•Yeast

• Gram stain

• Esterification

INTRODUCCIÓN

La fermentación es un proceso de transformación  de moléculas complejas en moléculas simples, es  catabólico y de oxidación incompleta, es completamente anaeróbico, su producto final es un compuesto orgánico, estos productos de fermentación varían de acuerdo al tipo de microorganismos, tipo de sustrato y factores ambientales tales como el pH y la temperatura.

Cuando consideramos las fermentaciones de microorganismos debemos de tener en cuenta dos factores importantes que son por un lado la NADH que se oxida a NAD y por otra parte se encuentra el aceptor de electrones  que es el piruvato o algún derivado de este.

Entre los tipos de fermentación encontramos la fermentación alcohólica, láctica acética y butírica.

La fermentación acido láctica y alcohólica son dos rutas metabólicas comúnmente usadas por las células para metabolizar azucares. La fermentación alcohólica se lleva a cabo en organismos del genero Saccharomyces; la fermentación láctica es una ruta metabólica anaeróbica en la cual se descompone la glucosa para obtener energía y el producto desecho es ácido láctico.

Algunos microorganismos usan oxigeno molecular en su metabolismo y crecen anaeróbicamente. El género de sccharomyces incluyen muchos tipos diferentes de levaduras y forman parte del reino de los hongos. Muchos de los reinos de este género se consideran importantes en la producción de alimentos. Un ejemplo de este tipo de bacteria será la que usaremos en esta práctica.

MATERIALES Y METODOS

• Paquete de algodón(1)
• Erlenmeyer de 100 ml (2)
• Probeta de 100 ml
• Tijeras
• Agitador magnético
• Espátula
• Vidrios de reloj (2)
• Tubos falcos (4)
• Micro pipeta (2)
• Puntas (2)
• Pipetas de 10 ml (2)
• Tubos de ensayo de 20 ml (5)
• Vasos de precipitado de 500 ml (2)
• Tubos de ensayo (6)
• Vasos de precipitado (50 ml)
• Porta objetos
• Mechero
• Pipeteador
• Microespacula
• Gradilla

EQUIPOS

• Espectrofotómetro
• Balanza analítica
• Baño termoestable
• Centrifugado
• Microscopio
• Planta de calentamiento  agitación.

REACTIVOS

• Agua destilada
• NH3
• MgSO47H2O
• CaCl22H2O
• Glucosa
• Levadura húmeda
• Soluciones
• Hidróxido de sodio (0,5gr)
• Fucsina
• Solución 40% de tartrato de sodio
• 2 litros de cultivo
• 2 litros de medio cultivo
• Aceite de inmersión

[pic 1]

MUESTREO Y ENSAYO

[pic 2]

INOCULACIÓN

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TINCIÓN DE GRAM

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CÁLCULOS Y RESULTADOS

MUESTREO Y ENSAYO

Tabla 1.1 Muestreo y ensayos de la solución de glucosa (10 y 15 g/l)

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