Ensayo de Triploidización mediante Técnica de Choque Térmico sobre ejemplares de Oncorhynchus mykiss para mejoramiento genético

Universidad Nacional de la Patagonia Austral[pic 1]

Unidad Académica Río Gallegos

PROPUESTA PARA TRABAJO DE CAMPO

INGENIERIA EN RECURSOS NATURALES RENOVABLES

Ensayo de Triploidización mediante Técnica de Choque Térmico sobre ejemplares de Oncorhynchus mykiss para mejoramiento genético.

ALUMNA: Melisa Sazatornil

DIRECTOR: M.Sc. Pedro De Carli

CODIRECTORA: Lic. Valeria Marcucci

Melisa Sazatornil

D.N.I.:

Alumna de la carrera Ingeniería en Recursos Naturales Renovables

INTRODUCCIÓN

La biotecnología para manipulación cromosómica ha hecho grandes contribuciones en todas las disciplinas de las ciencias biomédicas, la agricultura y las industrias farmacéuticas en las últimas décadas, lo que posibilita su aplicación en la acuicultura.

Dentro de la manipulación cromosómica en peces, se destacan los avances realizados de poliploidías en muchas especies. La poliploidía consiste en el incremento del complemento cromosómico diploide normal dando origen a organismos con tres (organismo triploide) o más juegos completos de cromosomas en sus células somáticas, lo cual origina también un incremento proporcional en el tamaño del genoma o ADN nuclear. La producción de poliploides mediante el tratamiento físico de los gametos se ha convertido en una importante herramienta comercial para la industria de la acuicultura mundial, centrada principalmente en la producción de individuos triploides en varias especies de peces (Nirchio y Oliveira, 2006).

En salmónidos, las hembras triploides tienen gónadas poco desarrolladas con muy pocos oocitos desarrollados. Estas anomalías reproductivas redundan en una ganancia en crecimiento y peso debido al retraso de la maduración sexual, evento que al hacerse presente conduce a una reducción en los índices de crecimiento, un incremento de la mortalidad y el deterioro de las características organolépticas de la carne, tanto así que las hembras de salmónidos llegan a invertir hasta 30% de su peso corporal en el desarrollo gonadal, lo cual les confiere escaso valor comercial. La inducción de la triploidía permite una distribución de las ventas a lo largo del año con una mejor planificación de la producción anual (Pineda Santis H et. al 2004).

Consideramos que la producción de peces triploides mediante choque térmico en caliente es una posibilidad biotecnológica viable para implementar porque requiere de un bajo presupuesto y los conocimientos fundamentales de un personal capacitado, por lo que es posible disponer de los recursos logísticos para alcanzar un alto porcentaje de triploides, y particularmente ventajosos debido al gran número de ovas que pueden ser tratadas (Ruane y Zimmermann, 2003).

El desarrollo del individuo desde el proceso de fertilización artificial hasta la eclosión de los alevinos esté regido por temperaturas muy definidas que denotan una continuidad en el proceso. El choque térmico consiste en dar un cambio, alto o bajo, de temperatura de forma drástica por poco tiempo, de tal forma que algunos procesos biológicos cambien, en este caso particular, el número de cromosomas del organismo. Ciertamente, el tiempo juega un papel importante en la aplicación del choque térmico ya que los extremos de temperaturas por períodos muy prolongados causan la muerte de los individuos.

Un efecto drástico del cambio de temperatura en el proceso de desarrollo embrionario ocasiona una mortalidad de un 50% en promedio, lo que es susceptible de reducir mediante pruebas de ensayo y error de pequeñas cantidades de ovas bajo distintos tratamientos térmicos (Nirchio y Oliveira, 2006).

Se han descrito tres metodologías para identificar el éxito del tratamiento y estimar el porcentaje de poliploides en los lotes tratados:1) cuantificación mediante citometría de flujo, esta metodología consume tiempo en su estandarización e importación de fluorocromos, 2)citogenética, determina el número de cromosomas de una especie, la determinación se realiza contando el número de cromosomas de células en metafase, y  3) volumen del núcleo del eritrocito, método indirecto donde el volumen del núcleo celular de los eritrocitos proporciona un valor comparativo con el núcleo de los individuos diploides (Nirchio y Oliveira, 2006).

El perfeccionamiento de las técnicas desarrolladas para la manipulación de la poliploidía en peces ha venido acompañado de un aumento en el interés por la viabilidad y el rendimiento de los individuos triploides. Los efectos de la inducción de triploidía en el metabolismo, la fisiología, los parámetros citogenéticos, la estructura de órganos y tejidos, el comportamiento, la calidad y conservación han sido investigados en varias especies de teleósteos (Pineda Santis H et. al 2004).

Los beneficios de producir individuos triploides con la ayuda de la biotecnología son mucho más evidentes en los aspectos productivos y económicos ya que se obtendría un aumento de la producción a un menor costo. Como ventaja de los organismos triploides respecto a los diploides en esta especie se destaca una diferencia en el peso corporal alcanzado a la edad de primera reproducción.

Este Trabajo de Campo se encuentra enmarcado en el Proyecto de Extensión MEJORAMIENTO EN LA PRODUCCIÓN DE OVAS DE TRUCHA ARCO IRIS PARA ACUICULTURA COMERCIAL, y tiene como objetivo ajustar las variables involucradas en la técnica de choque térmico para triploidización de hembras de trucha arcoíris (O. mykiss) y realizar la determinación de eficacia de triploidía.

METODOLOGIA

Se trabajará con ejemplares de trucha arcoíris obtenidos de la Estación Municipal de Piscicultura Isla Pavón, en la cercanía a la localidad de Piedra Buena.

El trabajo a desarrollar cuenta con dos etapas. En primer lugar se extraerán ovas y esperma de diferentes ejemplares adultos para realizar la fecundación, y luego, a las ovas fecundadas se les aplicarán los procedimientos los cuales constan de choque térmico en caliente para la inducción a la triploidía, que se realizan considerando temperatura y la duración del mismo. Posteriormente para conocer el porcentaje de poliploides se desarrolla la técnica de citogenética en la que se cuantifica el número de cromosomas de células en metafase. Esta etapa se realizará sobre individuos de un año aproximadamente, a los que se les aplicó el tratamiento térmico el año anterior.

...