Espectrofotometro

PRACTICA N°10

DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DEL AZUL DE METILENO

MATERIALES Y MÉTODOS:

Materiales:

1 fiola de 1 Lt.

1 fiola de 250 ml

Balanza analítica

1 Espátula

2 vasos de precipitado de 100 mL.

2 pipetas graduadas.

2 cubetas para espectrofotómetro

1 frasco de agua destilada

1 bombilla

1 espectrofotómetro Genesys 10S UV-VIS (190 -800 nm)

Muestra problema: Azul de metileno

Método:

Análisis Cuantitativo

Para llevar a cabo el análisis cuantitativo de una especie mediante la espectrofotometría, es preciso realizar una etapa previa de calibración. En dicha etapa se mide la absorbancia de varias muestras de concentración conocida, las cuales serán utilizadas para, mediante "comparación", calcular la concentración de una muestra problema tras medir su absorbancia.

Para llevar a cabo la etapa de calibración, se representa la absorbancia de las muestras de concentración conocida (llamadas patrones) a la longitud de onda de máxima absorbancia, frente a la concentración de dichas muestras. De esta manera se obtiene la Curva de Calibración. Según la ley de Beer, el resultado obtenido será una línea recta, cuya expresión matemática puede ser obtenida mediante excel.

Obtención del espectro de absorbancia.

A. Pesar 2 mg de azul de metileno y enrasarlo en una fiola de 1L con agua destilada. Colocar una cubeta de agua destilada en el espectrofotómetro y calibrarlo en cero. Luego medir la solución preparada a una longitud de onda de 400 a 700 nm, subiendo de 20 en 20 nm, medir la absorbancia y hallar la longitud de onda en la que tenga la máxima absorbancia. En papel milimetrado o en Excel, graficar longitud de onda (nm) en el eje x y Absorbancia en el eje y, marcar la longitud de onda máxima para el azul de metileno.

B. Pesar 2.5 mg de azul de metileno enrasarlo en una fiola de 250 ml con agua destilada y realizar las siguientes diluciones que se presentan en el siguiente cuadro. Medir las absorbancia a la longitud de onda máxima del azul de metileno.

La medición de la absorbancia de los tres patrones debe realizarse en orden creciente de concentraciones y utilizando una misma cubeta. Para ello, después de cada medida:

Desechar la disolución patrón ya medida

Limpiar la cubeta con agua destilada varias veces

Limpiar la cubeta con la nueva disolución patrón una vez

Llenar la cubeta con la nueva disolución patrón y medir

Medición de la muestra problema

Siguiendo el procedimiento conocido, medir la absorbancia de la muestra problema.

* Muestra problema 1=4.368 A

* Muestra problema 2=0.294 A

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