FIJACIÓN: Se refiere del tratamiento químico que se le hace al tejido para conservar su estado una vez retirado del ser vivo, y así retarde su degradación por estar fuera de él. Lo que más se usa para este proceso es formalina amortiguada y fijador

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FIJACIÓN: Se refiere del tratamiento químico que se le hace al tejido para conservar su estado una vez retirado del ser vivo, y así retarde su degradación por estar fuera de él. Lo que más se usa para este proceso es formalina amortiguada y fijador de bouin.

DESHIDRATACIÓN: Teniendo en cuenta que dentro de los componentes del tejido está en una gran parte constituido por agua, se le realiza primero un baño de alcohol al 50% y después alcohol al 100% para retirar el agua contenida en el tejido.

ACLARAMIENTO: Se le llama al proceso donde el tejido se torna a transparente en Xileno, ya que con este se trata al tejido con la ayuda de sus características mezclables con parafina fundida.

INCLUSIÓN: Para obtener una buena observación microscópica, se infiltra el tejido en un recipiente con parafina fundida (de modo que el tejido quede impregnado en ella), y se deja endurecer para que como resultado se obtenga un bloque de parafina que incluya el tejido.

CORTE/SECCIÓN: Este proceso se realiza por medio de un micrótomo (instrumento para cortar objetos y tejidos para ser observados en el microscopio), el grosor del corte varía entre5 y 10 pm, o por medio de una muestra congelada por nitrógeno líquido o en un portamuestras para congelación rápida en un crióstato, estos cortes se montan en un medio de congelación rápida y se cortan a temperatura menores a 0 por medio de una hoja de acero enfriada previamente.

MONTAJE: Ya realizados los cortes, estos se colocan en portaobjetos de vidrio enfriados con anterioridad, estos portaobjetos poseen un adhesivo y se espera a que alcancen una temperatura ambiente.

TINCIÓN: Para realizar este paso es necesario retirar la parafina del corte, se rehidrata y se tiñe, una vez teñido, se vuelve a deshidratar para que así se fije permanentemente en el cubreobjetos con un medio apto para el montaje. El cubreobjetos protege al tejido de daños además de que es necesario para el fin microscópico, observar y analizar. En esta actividad es necesario tener en cuenta que hay diferentes tipos de colorantes que se pueden agrupar en 3 clases; unos diferencian componentes ácidos y básicos de la célula, otros distinguen componentes fibrosos de la matriz extracelular y por último, sales metálicas que se arrojan en los tejidos y forman depósitos de metales en ellos.

2.describir colorante, en que casos se usa, que elementos de la celula colorea, etc

HEMATOXILINA: Tiñe los componentes ácidos de los tejidos, a los que da una coloración violeta. Tiñe intensamente los núcleos de las células, dado que estos contienen ácidos nucleicos ricos en radicales ácidos. La tinción por hematoxilina no indica tanto la constitución química de los componentes celulares, sino la densidad de cargas eléctricas negativas de los mismos. http://hematoxilina-eosina-uc.blogspot.com.co/

EOSINA: es un colorante basófilo (afinidad con lo básico, porque es acida),cuya propiedad está basada en su polaridad negativa, lo que le permite enlazarse con constituyentes celulares de carga positiva. Por ello colorea componentes y orgánulos citoplasmáticos, colágeno y fibras musculares, pero no los núcleos (que son básicamente ácidos nucleicos y están cargados negativamente,a no ser que la membrana sea permeable). Aquellos componentes que se tiñen con eosina son conocidos como acidófilos o eosinófilos. La coloración resultante de la tinción con eosina es rosada-anaranjada para citoplasmas, y rojo intenso en el caso de los eritrocitos. Es fuertemente fluorescente, aunque esta característica es muy poco utilizada. Esto solo sucede en células muertas. Por tanto, en una tinción con eosina encontraremos células con el interior teñido (muertas) y células solo teñidas en su entorno (vivas).

http://hematoxilina-eosina-uc.blogspot.com.co/

La tinción hematoxilina-eosina corresponde a la mezcla de hematoxilina y eosina, es el método más popular de tinción utilizado en histología y medicina diagnostica.

El método supone la aplicación de la tinción de hematoxilina, que por ser catiónica o básica, tiñe estructuras ácidas (basófilas) en tonos Azul y Púrpura, como por ejemplo los núcleos celulares; y el uso de eosina que tiñe componentes básicos (acidófilos) en tonos de color rosa, gracias a su naturaleza aniónica o ácida, como el citoplasma.

• Los núcleos aparecen en azul (hematoxilina).
• Los ácidos nucleicos asociados a proteína (ej. ribosomas) en violeta
• Fibra muscular en rojo
• Tejido conectivo en rosado

wikipedia

P.A.S: (ácido periódico-de Schiff) permite la determinación del glucógeno glucoproteínas, proteoglucanos que normalmente se encuentran en los tejidos conjuntivos, mucosas y membranas basales,de las mucinas, de los mucopolisacáridos neutros así como de los filamentos y esporasmicelianos. El ácido periódico transforma los glicoles en aldehído. El reactivo de Schiff,desteñido por el ácido sulfúrico, reacciona con los aldehídos libres formando un producto de condensación de color rojo, contra teñido con la hematoxilina. La hematoxilina se usa como contracolorante para intensificar el contraste.

http://www.leicabiosystems.com/es/preparacion-de-muestras/tinciones-especiales/detalles/product/leica-periodic-acid-and-schiff-special-stain-kit/

https://es.scribd.com/doc/80688931/Tincion-PAS

Los resultados obtenidos serán así

Material PAS positivo: rojo oscuro a magenta.

Compuestos PAS positivo :

 Polisacáridos simples: como el glucógeno y la celulosa.

Mucopolisacaridos neutros: se encuentran en el epitelio gástrico, en glándulas del duodeno y en cápsulas bacterianas, también en intestino y estómago.

Mucoproteínas como son algunas mucinas del tubo digestivo y del árbol respiratorio o bronquial, también la tiroglobulina que está en el tiroides y la hormona estimulante.

Glucoproteínas del suero, membrana basal y fibras de reticula.

Glucolípidos: como los gangliósidos y cerebrosidos.

 Compuestos PAS negativos.

Los mucopolisacaridos ácidos no pueden ser oxidados por el ácido periódico y por eso son PAS negativos.

https://es.slideshare.net/lilianambeltran/cido-peryodico-schiff-pas

AZUL DE METILENO: Colorante simple que actúa sobre todas las células bacterianas rápidamente y que no produce un color tan intenso que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente útil para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no celular no se tiñe.

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