FUNDAMENTACION DE LA TINCION DE GRAM

FUNDAMENTACION DE LA TINCION DE GRAM 

Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas. La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado solamente en el peptidoglicano. Por el contrario, la capa de peptidoglicano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior por medio de lipoproteínas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido. Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram negativas. La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a quela membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgánicos,como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano queposee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristalvioleta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa,perdiéndose la coloración azul-violácea. Pero por el contrario, las Grampositivas, al poseer una pared celular más resistente y con mayor proporciónde peptidoglicanos, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sinoque este actúa deshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que puedaescaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violácea. De este modo, consideramos bacterias gram positivas a las que se tiñen de color morado, y gram negativa a las que se tiñen de color rosado.

METODOS

• Recoger muestras.
• Hacer el extendido con un palillo de madera.
• Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero.
• Fijar la muestra con etanol durante un minuto o al calor (flameado tres veces aproximadamente).
• Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar un minuto.
• Enjuagar con agua no directamente sobre la muestra
• Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente.
• Agregar alcohol acetona y esperar entre 5 y 30 segundos según la concentración del reactivo (parte crítica de la coloración). (las gram - se decoloran, las gram + no)
• Enjuagar con agua.
• Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar un minuto. Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias gram negativas.
• luego lavar levemente con agua

Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.

De gran importancia en Microbiología porque permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), según se comporten ante esta tinción. El fundamento radica en la diferente estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano más fina y una capa lipopolisacarídica externa. Tras la tinción con el primer colorante (Cristal violeta) se efectúa un lavado con etanol que arrastrará al colorante sólo en las Gram (-), mientras que en lasGram (+) elcolorante queda retenido y las células permanecerán azules. Las células Gram (-) se teñirán después con un colorante de contraste (safranina) para que puedan observarse.

ENFERMEDADES NO SUPURATIVAS

Supuración: es la producción o expulsión de pus.

S. pyogenes origina diversas enfermedades supurativas y no supurativas. Aunque este microorganismo constituye la causa más frecuente de faringitis bacteriana, la fama de estos microorganismos se debe a las enfermedades potencialmente mortales provocadas por estas bacterias comedoras de carne, como evidencian las publicaciones que han inundado la literatura científica como la prensa sensacionalista.

Las infecciones no supurativas son:

• Glomerulonefritis aguda, es La segunda complicación no supurativa de la enfermedad estreptocócica, que se caracteriza por una inflamación aguda de los glomérulos renales con edema, hipertensión, hematuria y proteinuria. Las cepas nefritogénicas específicas de los estreptococos del grupo A se asoman con esta enfermedad. Las cepas faríngeas y las cepas de Hypoderma son diferentes. Las características epidemiológicas de la enfermedad son similares a las de infección estreptocócica inicial.
  El diagnóstico se basa en las manifestaciones clínicas y en el hallazgo de la evidencia de una infección reciente por S. Pyogenes. Los pacientes jóvenes generalmente tienen una recuperación sin complicaciones, pero en los adultos no está claro el pronóstico a largo plazo. En éstos se han observado pérdidas de la función renal progresiva e irreversible.

- La fiebre reumática es una enfermedad inflamatoria, no supurativa y recurrente producida por la respuesta del sistema inmunitario de algunas personas predispuestas a los antígenos de la bacteria estreptococo del grupo A betahemolítico, a partir de las dos o tres semanas de provocar una faringoamigdalitis aguda.

La fiebre reumática es una complicación tardía que puede afectar cualquier parte del organismo, siendo el principal órgano afectado el corazón, donde puede afectar al pericardio (pericarditis), al miocardio (miocarditis) o al endocardio (endocarditis). En la fase aguda produce una pancarditis que provoca valvulopatías cardíacas en la fase crónica. Afecta también a la piel (eritema marginado), a las articulaciones (poliartritis migratoria), al cerebro (corea de Sydenham) y al tejido celular subcutáneo (nódulos subcutáneos).

...