Factores que influyen en la separación cromatográfica

Objetivos

• Conocer y aplicar la técnica de cromatografía en capa fina, sus características y los factores que en ella intervienen.
• Calcular valores de Rf de varias sustancias.
• Deducir, a través del Rf la relación que existe entre la polaridad de las sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados.

Cuestionario

1. Defina brevemente los siguientes términos:

• Tipos de interacciones moleculares:

• Dipolo-dipolo: Ocurren entre moléculas con momento dipolar permanente (moléculas polares) y se producen como consecuencia de la atracción entre los dipolos eléctricos de dichas moléculas convenientemente orientadas.
• Dipolo instantáneo-dipolo inducido (fuerzas de London o de dispersión): Ocurren en cualquier tipo de moléculas, debido a los dipolos instantáneos que se generan como consecuencia de fluctuaciones de densidad electrónica y que inducen nuevos dipolos en las moléculas próximas a ellas.
• Dipolo-dipolo inducido: Ocurren entre moléculas polares y apolares (por lo tanto es siempre una interacción entre moléculas DISTINTAS) y se producen como consecuencia de la atracción entre los dipolos eléctricos permanente e inducido respectivamente de dichas moléculas.
• Puentes de hidrogeno: Esta interacción se presenta cuando un átomo de hidrógeno se encuentra unido a dos átomos con electronegatividad alta. Igualmente se puede definir como la interacción entre un hidrógeno de un enlace polar con otro átomo más electronegativo

• Resolución: El cociente de la distancia entre los centros delas dos bandas y el valor medio de la anchura de la misma.  

[pic 1]

• Coeficiente de partición: es el cociente o razón entre las concentraciones de esa sustancia en las dos fases de la mezcla formada por dos disolventes inmiscibles en equilibrio. Por tanto, ese coeficiente mide la solubilidad diferencial de una sustancia en esos dos disolventes.

[pic 2]

• Asimetría de picos: Es una consecuencia de la dependencia de la velocidad de migración con la pendiente de la isoterma. Tiene en general un origen termodinámico y es de gran importancia en cromatografía de adsorción debido a la heterogeneidad de los sitios activos y/o a la sobresaturación.
• Efecto de matriz: Consiste en una disminución o aumento de la respuesta instrumental del analito debido a la presencia de otros componentes. En otras palabras, para la misma concentración de analito, el análisis de una muestra real o de una disolución estándar del analito puro no proporciona la misma respuesta instrumental.  

1. Investiga dos aplicaciones de la cromatografía en el análisis ambiental

Determinación de la presencia de contaminantes orgánicos de interés o potencialmente toxicológicos en muestras de agua y suelo en concentraciones muy bajas.

Limpieza y aislamiento de sustancias.

1. Mecanismos de separación en cromatografía:

• Separación por adsorción (cromatografía de adsorción)

Diferente afinidad de los componentes de la muestra sobre la superficie de un sólido activo (componentes con polaridad baja o media)

•  Separación por reparto (cromatografía de reparto)

 Diferente solubilidad en fases estacionaria y móvil (Componentes con polaridad media o alta)

• Separación por tamaño molecular (Cromatografía de permeación de gel, de tamiz molecular o de exclusión por tamaños).

Parámetros de columna - Intervalo de trabajo: intervalo de M que pueden ser separados - Límite de exclusión: M mínimo a partir del cual las macromoléculas no experimentan retención.

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