Separacion cromatografica

Laboratorio de Famacognosia

1. N° de la práctica: 1

2. Unidad curricular asignatura: Unidad 1:

3. Título: Separación cromatográfica de componentes de un extracto vegetal

4. Objetivo

• Conocer y aplicar la cromatografía en papel como técnica de separación e identificación de los componentes del extracto vegetal.

5. Fundamento y método de la práctica:

Cromatografía

Un método de separación de mezclas disponible que la química orgánica es la cromatografía. La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o más compuestos por distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil. Lo compuestos pueden separarse debido a la influencia de dos efectos contrapuestos:

1. Retención. - Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser un sólido o un líquido anclado a un soporto sólido.
2. Desplazamiento. - Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase móvil, que puede ser un líquido o un gas.

El fenómeno de migración de los componentes de una mezcla a lo largo de una fase estacionaria, impulsados por la fase móvil, recibe el nombre de elución. La mezcla a separar se deposita en la fase estacionaria, mientras que, la móvil atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases. Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se distribuyan de modo distinto entre la fase móvil y la estacionaria.

Así, se tiene que las separaciones cromatográficas dependen de la diferencia entre los coeficientes de partición de los componentes entre dos fases inmiscibles. Una, fase móvil, progresa en relación con la otra, la fase estacionaria, y transporta las sustancias que se están separando. El coeficiente de partición K de una sustancia en un sistema de dos fases está dado por:

[pic 1]

Donde:

cs = concentración de la sustancia en la fase estacionaria.

cm = concentración de la sustancia en la fase móvil.

Cuando el coeficiente de partición es mayor para una sustancia, quiere decir que, su concentración en la fase estacionaria es mayor y es más lento su avance a lo largo del sistema cromatográfico.

Clasificación

En la Tabla 1 se muestra la clasificación de los métodos cromatográficos en función de los tipos de fases móviles y estacionarias, y en las clases de equilibrios involucrados en la transferencia de los compuestos entre las fases.

Tabla 1. Clasificación de los métodos cromatográficos

Cromatografía en papel

Es la más sencilla de las técnicas, pero solo nos proporcionará resultados cualitativos. A pesar de que está casi en desuso, conviene realizarlo para seleccionar el disolvente o mezcla de disolventes para realizar una óptima separación y además por ser económico y fácil de realizar.  El método se basa en un mecanismo de reparto, y consiste en depositar una pequeña cantidad de muestra en el extreme de una tira de papel filtro, que se deja secar. Luego se introduce la tira en un recipiente que contenga el disolvente, de manera que éste ascienda por capilaridad por la tira permitiendo que los componentes de la mezcla eluyan y se separen en función de la afinidad de los componentes con las dos fases, el más afín con la fase estacionaria se quedará cerca del punto donde se aplicó la muestra, y las menos afines y más solubles en el disolvente tendrán un desplazamiento mayor.

En cromatografía en papel se puede determinar el factor de retención (Rf) para cada componente separado de la mezcla con la siguiente expresión:

  (Ecuación 1)[pic 2]

6. Parte Experimental

6.1 Instrucciones Previas

Los estudiantes deben seguir las normas de seguridad y precauciones estándares indicadas en la primera clase para prevenir accidentes que puedan ocurrir dentro del laboratorio.

Antes de cada práctica el estudiante debe revisar la ficha de seguridad de los reactivos que va a usar, para tomar debidas precauciones.

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