GUIA MICROBIOLOGIA

PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA

OBJETIVOS:

1. Iniciación en las técnicas del estudio de microorganismos: cultivo, tinción y morfología.

Material necesario:

Cultivo de bacterias, levaduras, vino agriado.

Antibióticos.

Cristal violeta (1 g de cristal violeta en 100 cc de agua destilada). Lugol (1 g de iodo en 2 g de ioduro potásico en 100 cc de agua destilada). Fucsina básica (1 g de fucsina básica en 100 cc de agua destilada).

Aceite de inmersión.

Microscopio

Portaobjetos, asas de cultivo, mechero, cápsulas de Petri, tubos de ensayo. Papel secante.

1.- INTRODUCCIÓN

El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes.

Si se desea simplemente aumentar el contraste de las células para la microscopía, son suficientes los procedimientos que usan un solo colorante llamados de tinción simple. Sin embargo, a menudo se utilizan métodos que no tiñen de igual modo todas las células, es el proceso denominado tinción diferencial. Uno muy usado en microbiología es la tinción Gram. Basándose en su reacción a la tinción Gram, las bacterías pueden dividirse en dos grupos: grampositivas y gramnegativas. Esta tinción tiene gran importancia en taxonomía bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias.

Mientras que las bacterias gramnegativas son constantes en su reacción, los microorganismos grampositivos pueden presentar respuestas variables en ciertas condiciones (son gramlábiles). Por ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias grampositivas pierden la propiedad de retener el cristal violeta, y en consecuencia, se tiñen por la safranina apareciendo como gramnegativas. Análogo efecto se produce en ocasiones por cambio en el medio del organismo, o por ligeras modificaciones en la ejecución de la técnica. Por este motivo, es preciso atenerse, en la práctica, al procedimiento establecido.

Para explicar el mecanismo de la tinción de gram se han propuesto varias hipótesis fundadas en la naturaleza química de las paredes celulares de los microorganismos.

Aquí puedes ver las diferencias estructurales y químicas de los dos tipos de pared bacteriana:

Pared Gram +

capa densa y uniforme de 200 a 800 A)

ácidos teicoicos

Polisacáridos

proteínas (pocas veces)

glicopéptido (50% del peso seco)

Pared Gram -

capa interna delgada de 20 a 30 A cubierta por capas externas de densidad menor)

Lipopolisacáridos

Lipoproteínas

Proteínas

glicopéptido (10% del peso seco)

El mecanismo

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