Guía de trabajos prácticos. Microbiología remedial

UNIVERSIDAD DE CONCEPCIÓN

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA

GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS

MICROBIOLOGÍA REMEDIAL

2022

IMPORTANTE

Para el trabajo de laboratorio deben cumplirse las siguientes instrucciones:

1. Será obligatorio concurrir al laboratorio con delantal y lápiz demográfico o plumón indeleble.

1. Las personas que utilizan cabello largo deben llevarlo atado o utilizar una cofia.

1. Todo elemento que use en el laboratorio debe considerarse como contaminado y, por lo tanto, no debe dejarse en el mesón de trabajo, sino que los recipientes destinados a este objeto.  Los matraces, placas, tubos, etc., en los canastillos; las pipetas en frascos con desinfectantes y los portaobjetos y cubreobjetos en los frascos más pequeños.

1. Las asas metálicas deberán ser esterilizadas a la llama antes y después de usarlas.

1. Las siembras de material patológico, las resiembras y recolección de muestras se harán cuidadosamente para evitar la contaminación del mesón de trabajo; si esto ocurriera, mojar toda la región con lugol y avisar al profesor.

1. Al terminar su trabajo, deje el mesón limpio y todos los útiles en el lugar correspondiente.  Los microscopios deben quedar limpios.

1. Antes de abandonar el laboratorio, lávese las manos con jabón.

1. No se lleve las manos a la boca ni a los ojos, como tampoco saque fuera del laboratorio material contaminado o cultivo bacterianos.

1. Está prohibido tomar, comer o fumar en el laboratorio.

1. Cualquier accidente, por mínimo que sea, debe ponerse en conocimiento del profesor.

1. No deje objetos personales en el mesón de trabajo.

1. Rotule con un lápiz demográfico todo el material utilizado.

1. Debe utilizar mascarilla en toda la sesión de laboratorio.

PRÁCTICO NÚMERO 1

(Lunes 28 de febrero)

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE BACTERIAS

1. OBJETIVOS

1. Conocer los distintos materiales utilizados y las precauciones necesarias para trabajar en el laboratorio de bacteriología.
2. Distinguir la forma, agrupación y afinidad tintorial de células bacterianas teñidas con tinción de Gram.
3. Observar tinciones especiales para distinguir cápsula, esporas y flagelos bacterianos.

1. CONCEPTOS TEÓRICOS A REVISAR POR EL ALUMNO

Citología bacteriana. Los componentes estructurales de la célula   bacteriana, su ubicación celular y sus funciones.

1. TRABAJO PRACTICO A REALIZAR

1. Descripción de los materiales de uso habitual en el laboratorio microbiológico.
2. Observación de frotis teñidos con tinción de Gram: Observe al microscopio, las preparaciones que le entregarán, utilizando el objetivo de inmersión.  Dibuje la morfología, agrupación y afinidad tintorial de las bacterias observadas.
3. Observación de frotis de tinciones especiales: Observe al microscopio, las preparaciones para cápsula, flagelos y esporas, utilizando el objetivo de inmersión y dibuje.

TINCION DE GRAM:

Preparación del frotis a partir de cultivo sólido:

1. Coloque una gota de suero fisiológico sobre un portaobjetos limpio.
2. Con un asa recta, previamente esterilizada y enfriada, tome una pequeña muestra de la colonia bacteriana de interés y suspéndala en la gota de suero. Seque la preparación calentando suavemente cerca de la llama del mechero.
3. Fije la preparación pasando el portaobjeto dos o tres veces por la llama del mechero.

Preparación del frotis a partir de cultivo liquido:

1. Coloque una gota del cultivo sobre un portaobjetos limpio y distribúyala en una pequeña superficie, seque la preparación calentando suavemente cerca de la llama del mechero.
2. Fije la preparación pasando el portaobjeto dos a tres veces por la llama del mechero.

Con los frotis preparados, proceda a efectuar la tinción de Gram:

1. Cubra la preparación con violeta de genciana durante 1 minuto.

2. Escurra el colorante y lave con agua corriente.

3. Cubra la preparación con lugol durante 1 minuto.

4. Escurra el colorante y lave con agua corriente.

5. Cubra la preparación con alcohol-acetona durante 30 segundos.

6. Escurra el alcohol-acetona y lave con agua corriente.

7. Cubra la preparación con safranina (colorante de contraste) durante 1 minuto

8. Escurra el colorante y lave con agua corriente.

9. Seque la preparación y observe al microscopio con aumento de

    inmersión, colocando previamente una pequeña gota de aceite de

    inmersión sobre la preparación.

PRÁCTICO NÚMERO 2

(Martes 1 de marzo)

CRECIMIENTO BACTERIANO

1. OBJETIVOS

1. Conocer cómo se cultivan las bacterias en el laboratorio
2. Conocer cómo se manifiesta el crecimiento bacteriano en el laboratorio, sus principales características y su relación con el ser humano.

1. CONCEPTOS TEÓRICOS A REVISAR POR EL ALUMNO

Conceptos de fisiología bacteriana, curva de crecimiento, requerimientos nutricionales, factores físicos y químicos necesarios para el crecimiento de las bacterias.

TRABAJO PRACTICO A REALIZAR

1. Al inicio del práctico identifique algunos lugares de su laboratorio y exponga al ambiente placas con medios de cultivo durante el desarrollo de su trabajo práctico. Incube a 37ºC durante 24 horas.

1. Se demostrará los diferentes métodos para sembrar en medio sólido (agar) y los métodos para aislar bacterias. Se incubarán los cultivos a 37ºC durante 24 horas.

1. Se sembrará en tubo conteniendo medio de cultivo líquido y se incubará durante 24 horas a 37ºC.

1. Siembra y aislamiento de microorganismos en mezcla: Cada mesón recibirá un tubo conteniendo un cultivo en medio líquido con una mezcla de dos especies bacterianas (una cepa de bacteria Gram negativa y otra Gram positiva). A partir de esta muestra siembre una pequeña asada o una gota con pipeta Pasteur en una placa con agar sangre, tratando de diseminar (distribuir la muestra) de tal forma que se obtenga un adecuado desarrollo de colonias aisladas, para esto utilice la técnica de siembra por estría. Incube estas placas a 37ºC durante 24 horas.

NOTAS Y OBSERVACIONES

PRÁCTICO NÚMERO 3

(Miércoles 2 de marzo)

CRECIMIENTO BACTERIANO

(Continuación)

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