Genetica Aislamiento de dna

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL[pic 1][pic 2]

  ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS

LABORATORIO DE GENÉTICA MICROBIANA.

PRÁCTICA 1:

AISLAMIENTO Y  CARACTERIZACIÓN DEL DNA

 EQUIPO 4   SECCIÓN 1

* ERICKA FERNANDA CHÁVEZ GÓMEZ

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PROFESORES:

ILSE CITLALLI CALVO VILLAREAL.

MARGARITA PINEDA LÓPEZ.

GARCÍA RANGEL MARÍA VIRGEN.

ORTIZ GARCÍA CESAR ISMAEL.

5QM1                                       FECHA DE ENTREGA: 14/02/2019

INTRODUCCIÓN

El DNA (ácido desoxirribonucleico) es la molécula muy larga que lleva codificada la información genética, contiene miles de desoxirribonucleótidos de cuatro clases distintas, unidos en una secuencia que es específica de cada organismo.

La estructura de soporte de la doble cadena del DNA está formada por grupos fosfato y una pentosa que es la desoxirribosa. (Chávez, 2012).

 Se aislará y caracterizará DNA de Escherichia coli W3350, el fundamento del protocolo de Marmur y Kirby, en el cual se basa esta práctica, se puede explicar en 7 pasos:

• Lisis celular:  el Tris mantiene un pH constante de 7.8 aproximadamente. El EDTA es una gente quelante, el cual se emplea para proteger al DNA de la acción de nucleasas; y no permite los iones magnesio que actúen como cofactores de las nucleasas. La lisozima rompe los enlaces B-1,4 entre el ácido N-acetilmurámico y la N-acetil-D glucosamina de la pared bacteriana. El SDS solubiliza lípidos de membrana y tiene un efecto inhibitorio sobre las DNAsas. 2. Remoción de RNA: La RNAsa se encarga de la degradación del RNA.
• 3. Remoción de proteínas: mediante disolventes orgánicos; el fenol desnaturaliza proteínas debido a que ambas estructuras son lipofilicas, se atraen y se une a las proteínas y  éstas estarán rodeadas de micelas de fenol. El cloroformo desnaturaliza enlaces polipeptídicos; adicionamos alcohol isoamílico para que pudiera emlusificar el medio.(Surzycki, 2003)
• 4. Precipitación de DNA: Por medio de etanol o isopropanol puesto que el DNA es hidrofílico.
• 5. Concentración: Para determinar las concentraciones y purezas de los DNA aislados, utilizamos un espectrofotómetro con absorbancia a 260 nm; y la determinación de purezas a 260 nm y 280 nm
• 7. Determinación del espectro de absorción: Empleando las lecturas de las absorbancias a 200, 210, 220, 230, 234, 240, 250, 260, 270 y 280 nm.

La temperatura de fusión (Tm) del DNA se refiere a la temperatura a la cual el 50% del DNA de una muestra se desnaturaliza de DNA de doble cadena a DNA de cadena sencilla.

Resultados

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