Practica: Aislamiento de DNA plasmidico

Instituto Politécnico Nacional[pic 1][pic 2]

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Materia: Bioquímica y Biología Molecular

Practica: Aislamiento de DNA plasmidico

Objetivos

• Aislar DNA plasmidico bacteriano.
• Comprobar el aislamiento de Plásmido mediante una electroforesis en gel de agarosa.
• Conocer la importancia de los plásmidos en la clonación.

Resultados obtención de DNA plasmidico

 [pic 3]

Imagen 1.1 Separación del DNA plasmidico en gel del de agarosa

Discusiones

Obtención de DNA plasmidico

 Se puede observar en el pozo 6  del gel de agarosa (la imagen 1.1) que se  obtuvo una baja concentración de RNA degradado, pero no se obtuvo ninguna isoforma, por lo tanto, se puede decir que se obtuvo una baja concentración de DNA plasmidico. Debido a que no se obtuvo  ninguna isomorfa se puede concluir que  el proceso de la obtención de DNA plasmidico no fue el correcto.

Dentro de los factores que pueden influir son las cantidades para purificar y tratar el DNA además de la técnica del analista al homogenizar y adicionar las soluciones. Esto es, la forma en que se trate la muestra.    

SOLUCIONES

Para obtener el DNA plasmídico se adicionaron soluciones que tienen una función específica para la separación y obtención.

• Solución GTE. Presenta un medio osmótico y regula el pH del medio.
• Solución SDS-1% NaOH 0.2N.  rompe membrana plasmática libreando el citosol y el DNA cromosomal y plasmídico.
• Acetato de potacio 5M. Se encarga de precipitar macromoléculas como porteínas y el DNA cromosomal.
• Isopropanol. Se encarga de disminuir la constante dieléctrica de las proteínas que sigan unidas al DNA.
• Regulador tris-EDTA (TE). Mantiene la carga del grupo fosfato.

Soluciones para colocar muestra en agar.

• Bromuro de etidio. Se intercala entre las moléculas del ágar entre las bases nitrogenadas, por lo que en UV da la fluorescencia.  
• Azul de bromofenol. Mantiene el pka del fosfato, por lo que estará desprotonado.
• Azul de bromofenol.  Es el colorante que se une al DNA plamídico. Esto es con el fin de identificar la migración de estas moléculas.
• Regulador TB 1x. protege al plásmido y lo re suspende.

El agar utilizado está conformado por galactosa por lo que es selectivo en tamaño, forma y carga de las moléculas para poder desplazarse través del campo eléctrico aplicado al ágar. Cabe mencionar que se usaron 110V, para evitar derretir el agar. .  

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