DNA PLASMIDICO

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

PRÁCTICA NO. 13. “AISLAMIENTO DEL DNA PLASMIDICO”

INTRODUCCION

Los plásmidos son moléculas de DNA extra cromosómico, circular y de pequeño tamaño que se encuentran en muchas especies bacterianas y que se caracterizan por que se pueden replicar de manera independiente del DNA cromosómico.

A diferencia de éste, los plásmidos no son necesarios para la viabilidad general de la célula, pero pueden contener genes que contribuyen a la supervivencia en condiciones especiales, como los que confieren resistencia a antibióticos.

Algunas clases de plásmidos poseen además la propiedad conocida como “replicación relajada”, esto es, están presentes en forma de muchas copias por célula, lo que facilita enormemente su aislamiento y purificación.

Los plásmidos poseen un interés singular en Ingeniería Genética por ser uno de los sistemas vectores más sencillos de usar (un vector es el sistema que permite introducir en una célula el fragmento de DNA que se

pretende clonar; en esta célula anfitriona el vector se replica y expresa, en su caso). La molécula resultante de la unión del vector con el DNA de interés (denominado entonces “inserto”) se denomina molécula de DNA recombinado.

Para ser utilizado como vector de clonación, un plásmido ideal debe poseer la capacidad de replicación autónoma, ser lo más pequeño posible para permitir un fácil aislamiento y manejo, y contener sitios únicos de restricción y marcadores genéticos selectivos.

La mayoría de los plásmidos naturales no cumplen todas estas condiciones, por lo que una primera tarea de la Ingeniería Genética ha consistido en la construcción de plásmidos artificiales o recombinados, combinando en una misma molécula diversos rasgos útiles procedentes de los plásmidos naturales.

OBJETIVO

Realizar una electroforesis en gel de agarosa del plásmido obtenido y discutirá sobre las formas moleculares obtenidas.

RESULTADOS

DISCUSION

Como podemos observar las moléculas de ácidos nucleicos están cargadas negativamente, por lo que al someterlas a un campo eléctrico migran hacia el polo positivo de este a través del gel, a velocidades que dependen de sus tamaños: una molécula pequeña puede seguir su camino a través del gel más fácilmente que una molécula grande.

La detección tras la migración se realiza fácilmente gracias al empleo de un colorante intercalante (se intercala entre las bases de los ácidos nucleicos) que contiene el propio gel y es visualizado al emitir luz visible cuando el gel se ilumina con luz ultravioleta.

De acuerdo a la electroforesis obtenida y a la revelación en el transiluminador se puede ver que la mayoría de los equipos no obtuvo su DNA , cabe señalar que la primer mancha de DNA corresponden

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