DNA Aislamiento E Identificación

Introducción.

El DNA constituye el principal componente del material genético de los organismos junto con el RNA. Es el componente químico primario de los cromosomas y material en el que los genes están codificados. Los componentes del DNA son los nucleótidos, cada nucleótido está formado por un grupo fosfato, una desoxirribosa y una base nitrogenada. Lo conforman 4 tipos de nucleótidos diferenciados por sus bases nitrogenadas divididas en 2 grupos: dos púricas (Adenina y Guanina) y dos pirimídicas (Citosina y Timina). La estructura del DNA es una pareja de largas cadenas de nucleótidos y su función principal es de almacén de la información genética de las células. Esta información se utiliza para sintetizar proteínas. Los cromosomas además de DNA, contienen proteínas llamadas histonas, que permiten al DNA condensarse y ocupar un volumen muy pequeño.

Resultados.

Los Rf obtenidos de la cromatografía fueron:

Citosina(C)=0.45

Guanina(G)=0.49

Adenina(A)=0.53

Uracilo(U)=0.60

Timina(T)=0.71

ADN= 0.40, 0.49, 0.53, 0.70

ARN= 0.41, 0.43, 0.50, 0.62

Tabla 1. Resultados Obtenidos en el espectrofotómetro a diferentes longitudes de onda, de DNA de guayaba.

Long. onda Abs

200 0.161

205 0.133

210 0.273

215 0.365

220 0.604

225 0.341

230 0.330

235 0.896

240 2.5

245 0.997

250 0.821

255 0.898

260 0.835

265 0.813

270 0.800

275 0.765

280 0.699

285 0.606

290 0.488

295 0.401

300 0.349

Fig.1 Espectro de absorción del ADN aislado de guayaba.

Concentración del ADN aislado (g/mL)

C=Abs260nm/22500 F.Dilución.

C=0.835/22500 (1/10)=3.7x〖10〗^(-6)g/mL=

La concentración del ADN calculada con el nomograma incluido en el manual (pag. 124) es de : 0.026mg/mL.

Tabla 2. Relación de frentes de las bases púricas y pirimídicas obtenidas en cromatografía de placa fina.

Rf obtenidos en ADN Rf obtenidos en RNA Relacion de frentes ADN Relacion de frentes ARN

0.40 0.41 Citosina Citosina

0.49 0.43 Guanina Guanina

o.53 0.50 Adenina Adenina

0.70 0.62 Timina Uracilo

*Al realizar la relación de frentes se obtuvieron estos resultados, tenían la menor diferencia.

Pureza del DNA:

Pureza=

(Abs 260)/(Abs 280)=(0.835)/(0.699)=1.2

(1.2*100%)/2=60% de pureza.

Análisis de resultados.

Aislamiento de DNA de guayaba.

De acuerdo a lo revisado en la bibliografía, en el espectro de absorción del ADN la absorbancia máxima se presenta a los 260 nm puesto que las bases nitrogenadas de los ácidos nucleicos absorben fuertemente luz ultravioleta en la región de 260-280nm.Esta propiedad nos fue de gran utilidad para determinar la pureza de nuestro ADN y determinar la concentración mediante el uso del nomograma esta concentración fue del 0.026mg/mL. Se obtuvo la máxima absorbancia en 240nm el valor de absorbancia fue de 2.5 debido a la presencia de proteínas que no logramos separar. Lo que se demuestra con la pureza calculada de nuestro ADN que fue del 60%.

Hidrolisis de RNA y DNA e identificación de bases puricas y pirimidicas por cromatografía en capa fina.

El ADN y el ARN son moléculas formadas por unidades llamadas nucleótidos, cada nucleótido se compone por

...