IINFORME DE ACTIVIDADES PRACTICAS Nº 002

PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATOLICA DEL ECUADOR SEDE IBARRA[pic 1]

ESCUELA DE CIENCIAS AGRÍCOLAS Y AMBIENTALES

[pic 2]

IINFORME DE ACTIVIDADES PRACTICAS Nº 002

1. Datos informativos

Asignatura: Microbiología

Nombre: Esteban Sebastián Garrido Palacios

Fecha: 4-11-2015

Tema: Tinción de Gram

2. Cuestionario

1. Explique cuál es el paso más importante en la tinción gram y porque?

Pienso que fijar la muestra por calor es de mucha importancia ya que el calor fijará las bacterias al portaobjetos de forma que no se enjuaguen tan fácilmente durante la tinción. Además La clave es el peptidoglucano ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram negativas. Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen de manera distinta debido a estas diferencias constitutivas de su pared.

1. Grafique una bacteria gram positiva y gram negativa e indique sus partes

[pic 3]

Comparación de la membrana y pared celular entre un Gram positivo y Gram negativo - July 21, 2014

1. Como actúa los colorantes en cada una de las membranas.

• El cristal violeta penetra en todas las células bacterianas (tanto gram positivas como gram negativas) a través de la pared bacteriana.
• El lugol actúa de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta..
• El alcohol que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo cristal violeta. Los organismos gram positivos no se decoloran, mientras que los gram negativos sí lo hacen.
• La safranina sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias gram negativas.

1. Según su criterio: una bacteria E. coli es una bacteria gram negativa, pero se colorea como gram positiva. Indique que pudo haber sucedido.

La bacteria E. coli presenta dos membranas lipídicas entre las que se localiza una fina pared celular de peptidoglican, La bacteria se colorea como gram positiva debido que al ser la pared fina, no retiene el colorante durante la tinción de Gram. La Tinción negativa es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin teñir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células. La Tinción negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las células en la microscopia óptica, pero su máxima utilidad está en revelar la presencia de cápsulas alrededor de las células bacterianas.

1. Que es el LPS, antigeno O y el peptidoglican ademas, para que sirve en la membrana celular.

• Los lipopolisacáridos (LPS), también llamados endotoxinas, son polímeros complejos con restos de ácidos grasos como parte lipófila y cadenas características de oligosacáridos y polisacáridos, que forman la parte mayoritaria de la capa externa de la membrana externa de bacterias Gram negativas. En su conjunto, forman una capa protectora hidrófila en torno a la célula bacteriana que no puede ser atravesada por moléculas lipófilas.
• El antígeno O es la estructura más externa de la bacteria. Permite clasificar a las especies que lo poseen en serogrupos. Está formado por polímeros de oligosacáridos de longitud variable. Los azúcares que lo componen son neutros y acídicos, aminoazúcares, y raras veces azúcares inusuales como 6-desoxihexosas y 3,6-didesoxihexosas. Actúa como receptor para muchos bacteriófagos, y en el hospedador evita el reconocimiento del lipido A por parte de los macrófagos.
• El peptidoglicano o mureína es un copolímero formado por una secuencia alternante de N-acetil-glucosamina y el Ácido N-acetilmurámico unida mediante enlaces β-1,4. El peptidoglucano es muy resistente y protege a las bacterias de una ruptura osmótica en ambientes acuáticos y da a los tipos diferentes de bacterias sus formas. La cadena es recta y no ramificada. Constituye la estructura básica de la pared celular de las bacterias y de las Prochlorophyta.

3. Conclusiones

La tinción de Gram es una herramienta muy útil en el laboratorio de microbiología así como en los análisis clínicos y diagnostico medico siendo ineludible conocer su fundamento y procedimiento, para poder tener una correcta interpretación de los datos que nos otorga la diferenciación de Gram positiva y negativa concluyendo que debido a la estructura de sus paredes celulares tendrán o no propiedades patológicas diferentes.

4. Recomendaciones

• Es conveniente estandarizar los tiempos de tinción para cada laboratorio, ya que la calidad y concentraciones de reactivos pueden variar bastante.
• Lo más recomendable es realizar el gram de los cultivos de agares enriquecidos y de colonias aisladas y en crecimiento.
• Los gram directos de una muestra solo son útiles en ciertos casos
• La muestra no debe ser excesiva para poder determinar las otras características de la bacteria, como forma y agrupación.

5. Anexos

[pic 4]

Muestra – 100x

6. Bibliografía

...