Informe De Cromatografia

1. RESUMEN.

La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia. Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Diferencias sutiles en el coeficiente de partición de los compuestos da como resultado una retención diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una separación efectiva en función de los tiempos de retención de cada componente de la mezcla.

La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas que no se excluyen mutuamente:

• Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y que puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas síntesis).

• Medir la proporción de los componentes de la mezcla (finalidad analítica). En este caso, las cantidades de material empleadas son pequeñas.

2. OBSERVACIONES, CÁLCULOS Y RESULTADOS

2.1 SEPARACIÓN DE FLUORESCEÍNA Y AZUL DE METILENO.

Tabla 1 Cálculo del Rf de las manchas de fluoresceína y azul de metileno desarrollada en

Etanol 80%

Mancha Distancia recorrida

por la muestra (cm) Distancia recorrida

por el disolvente (cm) Rf

Fluoresceína 4.2 4.6 0.91

azul de metileno 0.3 4.6 0.06

Tabla 2 Cálculo del Rf de las manchas de fluoresceína y azul de metileno desarrollada en

Etanol 20%

Mancha Distancia recorrida

por la muestra (cm) Distancia recorrida

por el disolvente (cm) Rf

fluoresceína 3.9 4.6 0.84

azul de metileno 0 4.6 0

Revelado con luz ultravioleta

En la longitud de onda corta 254nm se observa que las manchas tanto de fluoresceína y azul de metileno cambian de color, la fluoresceína toma un color amarillo fosforescente y café en el centro; y en la longitud de onda larga 365nm se observa la fluoresceina de un color verde fosforescente y el centro se mira naranja. En las dos ondas el azul de metileno toma un color mas oscuro.

2.2 SEPARACIÓN DE NARANJA DE METILO Y AZUL DE METILENO.

Tabla 3 Cálculo del Rf de las manchas de naranja de metilo y azul de metileno desarrollada en Etanol 80%

Mancha Distancia recorrida

por la muestra (cm) Distancia recorrida

por el disolvente (cm) Rf

naranja de metilo 4.3 4.6 0.93

azul de metileno 0.3 4.6 0.06

Tabla 4 Cálculo del Rf de las manchas de naranja de metilo y azul de metileno desarrollada en Etanol 20%

Mancha Distancia recorrida

por la muestra (cm) Distancia recorrida

por el disolvente (cm) Rf

naranja de metilo 4.1 4.6 0.89

azul de metileno 0 4.6 0

Revelado con luz ultravioleta

En la longitud de onda larga de 365nm como de onda corta de 254nm no se observan cambios en el naranja de metilo, y el azul de metileno se torna oscuro en las dos ondas.

3. ANÁLISIS DE RESULTADOS.

En las dos muestras se observa la absorción correcta del naranja de metilo, pero hay una diferencia en el tiempo de absorción ya que la muestra con etanol al 20% parece absorber más rápidamente que la del etanol al 80%, esto puede deberse a que el etanol al 20% tiene mayor cantidad de agua que el de 80% por lo tanto este es más polar lo cual influye en la absorción y en el resultado del experimento debido a que en la placa con el etanol al 80% deja mucho más rastro de azul de metileno que en el etanol del 20% además en el resultado en el extremo superior de la placa la figura que se obtiene en los dos casos es más definida y concisa que en la de 20% en la que siempre deja como resultado una mancha distorsionada y para nada definida.

Una causa probable de error que pudo haber afectado el desarrollo del experimento y por ende nuestras observaciones y conclusiones es que al principio del experimento en la placa se aplicó una gota de azul de metileno demasiado abundante que pudo contribuir a que la separación sea más difícil y poco eficiente.

Revelado de las placas la mayor parte de las placas de cromatografía llevan un indicador fluorescente que permite la visualización de los compuestos activos a la luz ultravioleta (254 nm). El indicador absorbe la luz UV y emite luz visible. La presencia de un compuesto activo en el UV evita que el indicador absorba la luz en la zona en la que se encuentra el producto, y el resultado es la visualización de una mancha en la placa que indica la presencia de un compuesto. En el caso de compuestos que no absorben luz UV, la visualización (o revelado) del cromatograma requiere utilizar un agente revelador. Este tiene que reaccionar con los productos adsorbidos proporcionando compuestos coloreados.

4. CONCLUSIONES.

La cromatografía de capa delgada o capa fina presenta una elevada sensibilidad, lo que significa que pequeñas cantidades de muestra son suficientes para la obtención de resultados, además no requiere un instrumental complejo, lo cual implica que no precise una manipulación excesivamente especializada. Por su simplicidad y rapidez, la cromatografía de capa fina es una herramienta muy valiosa en el análisis en el laboratorio de química orgánica.

La mayor o menor velocidad de desplazamiento a lo largo de la columna depende directamente de la estructura de cada molécula así como de los grupos funcionales que pueda poseer. El motivo principal es su diferente polaridad. Moléculas más polares quedan más retenidas en la fase estacionaria, es decir "corren menos", mientras que las moléculas menos polares se ven menos retenidas y avanzan a mayor velocidad arrastradas por eluyente.

La polaridad de la mezcla de disolventes (eluyente) utilizado es clave para obtener una buena separación. Eluyentes más polares arrastran más fácilmente a los compuestos, es decir los compuestos "corren más" en eluyentes más polares. Por el contrario, mezclas de disolventes con poca polaridad desplazan los compuestos a través de la columna con mayor lentitud. Por esta razón el etanol al 20% arrastra con mayor velocidad los dos compuestos utilizados en la práctica, al poseer más cantidad de agua es

...