Informe laboratorio Cromatografía de capa fina y de columna

Informe laboratorio

Cromatografía de capa fina y de columna

Carlos Manuel Alzate Rincón

Juan David Collazos Escobar

Escuela de microbiología

Universidad de Antioquia

Cromatografía en columna

Introducción

Presenciamos una corta demostración por parte de la monitora Alejandra de cómo se realiza una cromatografía de columna, con el fin de separar una mezcla de azul de metileno y naranja de metilo, con silica gel y alcohol etílico.

Objetivos

1. Observar cómo se realiza una cromatografía de columna y su efectividad como método de separación.

Marco teórico

Esta cromatografía de columna  es un método de separación que consta de una fase estacionaria solida por la que circula una fase móvil liquida, es usada para separar una mezcla determinada de solutos. Al verter la mezcla de solutos en la columna cromatográfica, el soluto que tenga mayor afinidad con la fase móvil, fluirá a través de la fase estacionaria, mientras que el otro soluto será retenido por está, realizándose así la separación de solutos.

Procedimiento

Se preparó la columna cromatográfica y se colocó silica gel dentro de ella, posteriormente se vertió alcohol etílico y se aplicó presión para que este pasara a través de la silica gel hacia el vaso de precipitados, luego se vertió la mezcla a separar (teóricamente el soluto que posea una mayor afinidad con la fase móvil, pasara derecho hacia el vaso de precipitados y el otro quedara retenido en la fase estacionaria), se aplicó presión nuevamente, separando así los solutos.

Análisis de resultados

El método de separación fue un éxito, se logró separar la mezcla de azul de metileno con el naranja de metilo en la demostración hecha por la monitora Alejandra, el naranja de metilo paso directamente al vaso de precipitados teniendo esté mayor afinidad con el alcohol etílico mientras que el azul de metileno fue retenido por la silica gel.

[pic 1]

Conclusiones

- El objetivo principal de la cromatografía es separar los distintos componentes de una mezcla y en algunos casos identificar estos si es que no se conoce su composición.

- La cromatografía de columna es un método de separación muy efectivo que a su vez es muy sencillo de realizar ya que no requiere equipamientos avanzados

Cromatografía de capa fina

Introducción

En la práctica de laboratorio usamos la técnica física de separación llamada cromatografía de capa fina, que consistía en separar compuestos orgánicos en solución mediante una fase móvil (uno o varios disolventes) de un grado de polaridad acorde a los compuestos que se quieren separar, un dato importante es que la fase móvil y la estacionaria, que es donde están los compuestos a separar, no pueden ser miscibles.

Objetivos

• Separar una mezcla de compuestos orgánicos en solución mediante el método de cromatografía de capa fina.
• Escoger cual proporción de solvente da una mejor separación de las muestras.
• Identificar los compuestos separados de la muestra problema.
• Calcular el valor de Rf para cada compuesto en la proporción de solvente escogida.

Aspectos teóricos 

Cromatografía es esencialmente un método físico de separación en el que los componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una inmóvil (lecho estacionario), y otra móvil (fase móvil) la cual percola a través de la primera. El proceso cromatográfico se da como resultado de repetidos procesos de sorción-desorción durante el movimiento de los componentes de la mezcla arrastrados por la fase móvil a lo largo del lecho estacionario (elución), produciéndose la separación debido a las diferencias en las constantes de distribución de los componentes de la mezcla entre la fase estacionaria y la móvil. A la distribución final de los componentes en función de su posición sobre el lecho estacionario, o del tiempo en que eluyen se le denomina cromatograma.

Prácticamente no existen restricciones sobre la naturaleza de las fases a utilizar, siempre que la fase estacionaria sea sólida o líquida y la fase móvil líquida o gaseosa, por lo que es posible, en principio, realizar por medio de estas técnicas la separación de los componentes de cualquier mezcla. Por otra parte, la utilización de las técnicas cromatográficas no está exenta de dificultades, debido fundamentalmente a la gran cantidad de parámetros que pueden influir en el proceso de separación, lo cual dificulta la elección de las condiciones óptimas de separación y en muchas ocasiones implica la irreproducibilidad de los resultados. Por ello la cromatografía no es una técnica de rutina que pueda aplicarse sin más a cualquier mezcla, sin invertir en muchos casos gran cantidad de esfuerzo y tiempo.

Procedimiento

• Marcación de las capas cromatográficas: consistía en rayar una línea horizontal aproximadamente a medio centímetro arriba de uno de los extremos de ambas placas.
• Sembrado de la muestra: con un capilar se ponía una pequeña cantidad de muestra sobre la línea anteriormente dibujada que contenía los componentes a analizar que eran β-naftol, resorcinol y Acido gálico, y en otra parte de la línea se colocaba una muestra problema, esto se hace en ambas placas.
• Las muestras se introducen en 2 cámaras cromatográficas con una mezcla de hexano- acetato de etilo, una en proporción 8:3 n°4 y la otra 6:4 n°3 como se observa en la siguiente imagen.

[pic 2]

• Cuando la fase móvil suba hasta casi hasta el otro borde de las placas, se retiran de la cámara cromatográfica y se ponen en una cámara de yodo para su respectivo revelado.

Resultados

Análisis

• En el proceso de obtención de la placa cromatográfica que se hizo en la cámara con la solución 8:2, no se identifican bien los componentes, suponemos que fue por causas de humedad de la placa o un mal sembrado de la muestra.
• La mejor mezcla de solución para las placas fue la de hexano-acetato de etilo 6:4, para explicar esto  tomamos en cuenta el orden de polaridades de sustancias usadas para las fases móviles más usadas:

Éter de petróleo< hexano

Como podemos identificar el hexano tiene un grado de polaridad menor que el acetato de etilo, por ende la mezcla en proporción 8:2 tendría más partes del hexano que es menos polar, por tanto, no atraería de una manera eficiente las sustancias polares con las que trabajamos, en cambio la muestra de proporción 6:4 tiene un mayor grado de acetato de etilo logrando así una mejor atracción polar de las sustancias separándolas con mayor eficacia.

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