La Cromatografia de capa fina

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CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Cruz, R., Ivan; Delgado, P., Jared; García, G., Leonardo; Fernández J., Adrián

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Resumen:

La cromatografía es un proceso de separación y análisis de una mezcla en dos o más compuestos que involucra la distribución de los mismos en dos fases, una móvil y otra estacionaria. La cromatografía comprende una amplia gama de variedades para poder llevar a cabo este proceso, las cuales dependen de la naturaleza de las dos fases involucradas en la determinación cromatográfica, la cual puede ser sólido-líquido, líquido-líquido o líquido-vapor. La cromatografía que llevamos a cabo fue una del tipo sólido líquido, específicamente cromatografía de capa fina (CCF), donde la fase estacionaria se encuentra en una placa especial, la cual está recubierta con el compuesto que forma la fase estacionaria. El uso de la fluoresceína fue esencial para poder determinar cuánto se desplazó cada componente.

Abstract:

The chromatography is a separation and analytical process of a mix that is separated in two or more compounds that are distributed between two phases, one of them mobile and the other one stationary. The chromatography has a lot of varieties to make the best performance of the process, these varieties are related to the nature of the two phases involved in the chromatography determination, there are solid-liquid, liquid-liquid, and liquid-vapour. The chromatography that we use in this work was a solid-liquid type, specifically the thin layer chromatography (TLC), where the stationary phase is in the cover of a special sheet. The use of the fluorescein is an important factor to determine how much each compound was displaced.

Palabras clave: cromatografía, CCF, fluoresceína, capilaridad, eluyente.

Introducción

La cromatografía es un proceso de separación y análisis en el cual se encuentran involucradas dos fases, una móvil y otra estacionaria.

En la cromatografía analítica en capa fina, la fase estacionaria o también llamada, absorbente, se encuentra colocada uniformemente, formando una finísima capa de un espesor en torno a 0.1 mm, sobre un soporte o placa de vidrio o metal.

La mezcla que deseamos analizar se colocará a una corta distancia del borde inferior de la mencionada placa, la cual introduciremos en una cubeta o recipiente que contendrá la fase móvil, o también llamado, eluyente.

La fase móvil irá ascendiendo poco a poco sobre la placa de la fase estacionaria a través de capilaridad, desplazando a los diferentes componentes de la mezcla a analizar, a distintas velocidades, lo que provocará la separación de la mezcla. Cuando el frente del disolvente se sitúe próximo a la parte superior de la placa, sacaremos la placa de la cubeta con la finalidad de dejarla secar para poder ver las manchas de los diferentes componentes.

La relación de las distancias recorridas por el compuesto y por el disolvente, desde el punto de origen del cromatograma, se conoce como Rf (rate factor), el cual posee un valor constante para cada compuesto en condiciones determinadas. Estas condiciones pueden ser el tipo de absorbente utilizado, el tamaño de la cubeta, la temperatura, el disolvente, etc. Es poco factible reproducir exactamente las condiciones experimentales, así que se suele comparar una muestra con otra, eluyendo ambas dentro de la misma placa.

Así, para poder calcular el Rf, se sigue la siguiente fórmula mostrada en la figura 1:

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Figura 1. Cálculo del Rf

La distancia que recorre el compuesto se suele medir desde el centro de la mancha, por lo cual se suelen hacer unas marcas en la placa, si dichas manchas son extremadamente grandes, el valor del Rf será erróneo. Así realizamos unas marcas en la placa donde depositaremos con ayuda de una pipeta un mínimo de muestra.

Para elegir un eluyente, se recomienda elegir un disolvente en el que los componentes que formen la mezcla presenten un Rf de entorno a un 0.3 ó un 0.5. Para encontrar el eluyente ideal, es necesario probar con diferentes disolventes de distintas polaridades o con mezclas de varios de ellos. En estos casos, debemos cambiar a disolventes más o menos polares, según sea el caso.

Los eluyentes más comunes usados en la CCP son: n-hexano, ciclohexano, tolueno, acetato de etilo, acetona, isopropanol, dietil-éter, metanol, etanol, cloroformo y ácido acético.

Una vez realizada la cromatografía, pasamos a su visualización. La gran mayoría de las placas cromatográficas contienen un producto indicador fluorescente que permite la visualización de los compuestos que son activos a la luz ultravioleta, concretamente a 254 nm. El indicador absorbe la luz UV, y emite luz visible, por lo general de color verde. La presencia de un compuesto activo que se encuentra en el UV evita que dicho indicador absorba luz en la parte en la cual hemos colocado el producto, lo cual se traduce en ver una mancha en la placa lo que nos indica la presencia de un determinado compuesto.

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