Informe de ráctica de Cromatografía

Observaciones.

En nuestra cromatografía en placa fina, se obtuvo una mancha grande que sólo se pudo observar con el revelador que consta de una lámpara de luz ultravioleta.

Discusión de resultados.

Experiencia 1.Separación de carotenos

Se colocó la columna para cromatografíade manera vertical, con una pinza para bureta sujeta a un soporte universal y se le colocó un poco de algodón en la base de la columna. Posteriormente se empacó la columna mezclando  en un vaso de precipitados 15mL de hexano, 15mL de acetato de etilo y 4g de sílica gel (teniendo cuidado de no inhalarlo) y se vertió en la columna.

Dejamos la llave de salida abierta para dejar gotear el disolvente uniformente y lo recolectamos en el vaso de precipitados, se realizó este procedimiento una vez más y se introdujo una capa de 1cm de Na2SO4anhídrido sobre la superficie de sílica gel, para posteriormente llenar en su totalidad la columna con el disolvente.

Para esto se realizaron varias veces el mezclado del disolvente en la columna, ya que en el vaso de precipitados quedaban residuos de la silica gel y no teníamos que dejar que se secara ya que esto provocaría que se agrietara la silica gel.

En nuestra experiencia, tuvimos el error de vaciar un poco de silica gel seca en nuestra columna, lo que provoco que se agrietara, por lo cual nuestra experiencia no fue exactamente la esperada.

Lo depositamos dentro de la columna, sin permitir que se derramara.

Teniendo lista ya una mezcla de hexano-acetato de etilo 1:1, se goteo dentro de la columna para que los pigmentos penetraran en la sílice, donde se mantenía abierta la llave para permitir el desarrollo del cronograma, manteniendo un volumen constante y se obtuvieron 6 muestras, que se cubrieron con papel aluminio.

Experiencia 3. Separación por cromatografía en placa fina de una mezcla de colorantes.

En una cromatoplaca de 7 x 3 cm, se dibujó con lápiz de 0.5 mm una línea de 0.5 cm de distancia del borde inferior, se aplicó sobre esta en tres puntos equidistantes, por medio de una micropipeta previamente elaborada con un capilar, las fracciones más coloridas obtenidas en la experiencia anterior y la mezcla original, el concentrado de espinaca.

Después se dejó secar y desarrollar el cronograma en una mezcla de acetato de etilo: etanol 7:3 teniendo cuidado que no sobrepasara los puntos de aplicación y esta se recorriera hasta antes del borde superior de la placa.

Lo obtenido aquí, se pudo observar gracias a un aparato especial para visualizar nuestra experiencia de cromatografía con una luz ultravioleta, que nos permito ver los resultados de nuestra placa, se pudo ver como las fracciones y el concentrado al secarse recorrió cierta distancia, lo cual indico que tuvimos éxito en nuestra visualización de cromatografía, a pesar de que no colocamos más de 10 gotas de concentrado en el papel filtro anteriormente y que en nuestra columna la mezcla se agrieto.

Cuestionario.

1. Indicar qué precauciones se deben tener al empacar una columna de cromatografía.

Al agregar la suspensión de sílica-gel es una mezcla de hexano: acetato de etilo 1:1 hay que golpear ligeramente con los dedos para que el empacado sea uniforme.

Mantener un goteo uniforme en la llave de salida del disolvente, pero hay que tener cuidado de no dejar la sílica-gel sin disolvente.

Mantener siempre el nivel del eluyente 0.5cm por arriba del nivel del adsorbente.

La columna debe llenarse hasta tres cuartas partes de su capacidad.

Conocer la polaridad del adsorbente para así elegir la polaridad del disolvente.

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