Informe Laboratorio de Biologia Cromatografia

PRÁCTICA CROMATOGRAFIA  [pic 1]

Kevin Montoya Bermúdez, Alejandro Correa Moncada,
Juan David Paredes Valencia, Geraldine Palacio Monsalve

RESUMEN

INTRODUCCIÓN

La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia; permite la separación de los componentes de una mezcla por el arrastre selectivo que ejerce un solvente liquido o gaseoso que se mueve a través de un material poroso, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.  Se constituye principalmente en dos fases, una móvil (el solvente) y una estacionaria (material poroso).

MATERIALES Y MÈTODOS

MATERIALES 

-Papel cromatógrafo o de filtro

-Papel periódico

-Papel Bond

-Agua destilada

-Mezcla de acetona y éter de petróleo

-Acetona

-Éter de petróleo

-Mezcla de Acetona y cloroformo

-Hojas verdes

-Tinta negra o azul

-Tubos de ensayo

-Lamparas

-Gradillas

-Palillos de dientes

-Tijeras

-Pipetas

-Regla

-Mortero

-Embudo de separación

-Gasas.

MÉTODOS

1.        Cromatografía de una muestra inorgánica

En un tubo de ensayo se adiciona sin mojar las paredes 2ml de agua destilada, luego  se pone un punto pequeño de tinta con un palillo de dientes en un extremo del papel cromatografico a una distancia en la cual no se sumerja por completo en el líquido del tubo. Se sumerge el papel evitando que se doble en el tubo de ensayo y se deja en reposo hasta que el agua destilada este casi al mismo nivel del borde del tubo; luego se retira el papel y se marca rápidamente los puntos a los cuales llegaron el solvente y cada uno de los pigmentos.

Se mide la distancia recorrida por el solvente desde el centro de la muestra hasta el punto que señalo, por último se mide la distancia máxima recorrida por cada uno de los pigmentos desde el centro de la muestra.

2.        Cromatografía de una muestra orgánica

En este procedimiento se trabaja de igual forma que en la muestra inorgánica, usando como solvente 2 ml de la mezcla de acetona y éter de petróleo; la muestra de pigmentos vegetales es preparada previamente antes de iniciar la práctica de laboratorio.

3.        Variaciones del cromatograma con diversos solventes

Se preparan tres cromatografías diferentes con la muestra de pigmentos vegetales con el mismo procedimiento usado hasta ahora, con papel cromatografico como fase estacionaria, variando el solvente (acetona, éter de petróleo, agua destilada); luego de extraer y marcar los resultados  se comparan estos tres cromatogramas entre sí y con el obtenido en el paso 2.[pic 2]

4.        Variaciones del cromatograma con diversas fases estacionarias

Se preparan tres cromatografías diferentes con la muestra de tinta en diferentes tipos de papel (de filtro, periódico, bond) usando como solvente en cada uno de ellos 2ml de agua destilada. ); Luego de extraer y marcar los resultados  se comparan estos tres cromatogramas entre sí y con el obtenido en el paso 1.

RESULTADOS

1. Cromatografía de muestra inorgánica (tinta)

En esta técnica empleada se pudo observar la aparición de 6 colores de los cuales se empezaba con un desprendimiento de la tinta de color azul oscuro, pasando por un azul negro, subiendo con un azul claro, pasando por un naranja, verde y amarillo rojizo.

[pic 3]

(Figura 1 Cromatografía en muestra  inorgánica)

1. Cromatografía de muestra orgánica (pigmentos vegetales)

En esta técnica empleada se pudo observar la aparición de 3 colores solamente. En los cuales se empezaba en el desprendimiento de los pigmentos con un verde claro, luego un verde oscuro y por último rojo.

[pic 4]

(Figura 2 Cromatografía en muestra  orgánica)

1. Interpretación de los cronogramas

Tinta y agua destilada.

1. AZUL OSCURO

RF: 3,2/6,8= 0,47

1. AZUL NEGRO

RF: 3,5/6,8= 0,51

1. AZUL CLARO

RF: 4,2/6,8 = 0,62

1. NARANJA

RF: 5,5/6,8= 0,81

1. VERDE

RF: 6,0/6,8= 0,88

1. AMARILLO ROJIJO

RF: 6,5/6,8= 0,96

Pigmentos vegetales. Éter de petróleo y acetona.

1. Verde claro

RF: 6,5/9,3= 0,70

1. Verde oscuro

RF: 8,5/9,3= 0,91

1. Rojo

RF: 9,0/9,3= 0,97

1. Variaciones del cromatograma con diversos solvente

Esta técnica nos sirve para la observación de cuál es la mejor fase móvil así que utilizamos tres tipos de solventes distintos para poder determinar cuál sería el mejor solvente.

ACETONA:

En esta muestra observamos la aparición de cuatro colores de los cuales eran según este orden:

• Verde claro

• Verde oscuro

• Amarillo

• Azul

ÉTER DE PETROLEO:

En esta muestra observamos la aparición de cinco colores de los cuales estaban según este orden:

• Verde claro

• Verde oscuro

• Amarillo claro

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